Controle de Qualidade I

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Controle de Qualidade
de Fitoterápicos: Sistema de 
Cromatografia Líquida de Alta 
Eficiência
Profa. Dra. Luzia Kalyne A. M. Leal
Fitoterápicos: Controle de Qualidade
•Materiais 
estranhos
•Cinzas 
•Microbiologia
• Macro e 
Microcospia
da planta
• Perfil 
fitoquímico
• Identificar e Quantificar 
Marcadore(s) 
Autenticidade
Pureza
e Integ.
Análise
marcador
Laudo
técnico
Análise Interdisciplinar
Controle de Qualidade (CQ) de 
plantas e produtos derivados: 
Como fazer?
• Monografias Farmacopéicas
• Publicações oficiais
• Desenvolver e validar método
Portaria nº 116/SVS, 1996; RE 899, 2003
Controle de Qualidade Físico-
químico: métodos analíticos
• Gravimetria
• Espectrofotometria
• Cromatografia - Cromatografia Líquida Alta 
eficiência (CLAE). Tipos de Cromatografia:
- Adsorção
- Partição
- Troca Iônica
Ânions (-SO3-) ou cátions (-N(CH3) 3+
- Exclusão molecular
• Outros
Cromatografia de Adsorção
• Utiliza uma fase estacionária sólida 
e uma fase móvel líquida ou gasosa
FASE MÓVEL
FASE ESTACIONÁRIA
O soluto é ADSORVIDO na superfície da partícula sólida 
FASE ESTACIONÁRIA
Cromatografia de Adsorção 
em Coluna
Sistema CLAE
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
Sistema CLAE
CLAE ou
High Performance Liquid Chromatographic (HPLC)
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
CLAE: FASE MÓVEL
• Fase Móvel
- Exemplo: MeOH, ACN, tampão etc
• O que é a Eluição?
• Eluição
- Isocrático
- Gradiente
• Fase Móvel
CLAE: condições
- Solventes grau CLAE
- Água ultrapura (sistema de purificação)
- Membranas para filtração
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
CLAE: injetor
• Injeção da amostra no sistema
Volume de injeção (1-500 μL)
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
CLAE: fase estacionária
• Partículas microporosas de sílica (µm)
- Permeáveis ao solvente
- Área superficial: centenas de m2/g
• Sílica: grupos silanol (Si-OH)
Partícula 
de sílica
Si- OH
CLAE: fase estacionária
Partícula 
de sílica Si- O – Si - R
CH3
CH3
Fase estacionária ligada
R=(CH2)17CH3 Octadecil
R=(CH2)7CH3 Octil
Exemplos de Fases Reversas:
• Fase estacionária
CLAE: condições
Considerar na seleção a natureza 
da amostra 
- Colunas (tamanho, enchimento, etc)
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
á
CLAE: exemplo de 
detectores
• Espectrofotométrico
• Fluorescência
• outros
Espectrofotometria
Método analítico que utiliza a luz para
medir a concentração de espécies
químicas
Propriedades da Luz
A LUZ pode ser descrita em termos de 
partículas ou de ondas
λ = Comprimento de onda é a distância entre dois máxi-
mos vizinhos. 
λ
y
x
Campo elétrico
Campo magnéticoz
Espectrofotometria
Faixa de comprimento de onda de
energia eletromagnética de interesse:
nm = nanômetros; μm: micrômetros
ultravioleta 200 – 380 nm
visível 380 – 780 nm
infravermelho 3 – 15 μm
Região Faixa 
Espectrofotometria
FONTE
DE LUZ
SELETOR DE 
COMPRIMENTO 
DE ONDA
AMOSTRA
DETECTOR
Io
I
Transmitância (T): é 
a fração da luz que 
passa pela amostra
T: Io/I
Absorvância ?
Análise espectrofotométrica 
quantitativa
Absorvância (A): quantidade de Luz 
absorvida. 
A: kbc
c= concentração da amostra
b= distância percorrida pela luz 
na solução (espessura)
k= constante de proporcionali-
dade, característica do analito 
• Lei de Beer-Lambert*: “A” é diretamente
proporcional à concentração da amostra
Farm. Bras. IV Ed., Parte I, 1988
* Atenção: essa lei pode por vezes ser desobedecida 
A análises Espectrofotométrica
quantitativa tem como princípio 
a relação proporcional existente 
entre a quantidade de luz 
absorvida e a concentração do 
analito em solução
Fase móvel
Bomba
Injetor
Coluna
Detector
Sistema CLAE
CLAE: processo de eluição e detecção
O sinal gerado pelo 
detector é utilizado 
para construir o 
cromatograma
Tempo (min)
Tempo de retenção
Área do pico
Curva de Calibração
DADOS ESPECTROFOTOMÉTRICOS UTILIZADOS
PARA A CONSTRUÇÃO DA CURVA DE CALIBRAÇÃO
Proteína (μg) Absorvância (nm)
5,0 0,185 0,187 0,188
10,0 0,282 0,272 0,272
15,0 0,345 0,347 0,392
20,0 0,425 0,425 0,430
25,0 0,483 0,488 0,496
...... 
Considerações finais
BIBLIOGRAFIA
Farmacopéia Brasileira. IV Ed. Parte I. São Paulo:
Atheneu Editora LTDA, 1988.
GIL, E.S. Controle físico-químico de qualidade de 
medicamentos. II Ed. São Paulo: Pharmabooks, 2007
HARRIS, D.C. Análise química quantitativa. VI Ed. 
Rio de Janeiro: Livros técnicos e científicos Editora S.A. 
2005