DNS para Carboidratos

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DNS para Carboidratos
MATERIAIS E MÉTODOS
Materiais Utilizados:
Tubos de ensaio;
Pipetas graduadas de 1mL e 10mL;
Pipeta volumétrica de 1mL;
Pipetador;
Água destilada;
Solução padrão de glicose;
Reagente DNS;
Banho Maria;
Estante para tubos de ensaio;
Becker;
Espectrofotômetro.
Metodologia:
Preparo da Curva Padrão:
Separou-se 5 tubos de ensaio, numerando-os de acordo com as diluições;
Adicionou-se a cada tubo a amostra de glicose padrão visando as seguintes concentrações: 1g/L, 0,8g/L, 0,6g/L, 0,4g/L e 0,2g/L, ou seja, adicionou-se 1mL, 0,8mL, 0,6mL, 0,4mL e 0,2 mL de amostra padrão de glicose;
Completou-se o volume dos tubos, com H2O, a 1mL: 0mL no 1º tubo; 0,2mL no 2º; 0,4mL no 3º; 0,6mL no 4º e 0,8mL no último;
Adicionou-se em seguida 0,5mL do reagente DNS em cada tubo de ensaio;
Levou-se os 5 tubos ao banho Maria durante 5 minutos e a temperatura de 100ºC;
Após	o	tempo	decorrido,	interrompeu-se	a	reação colocando os tubos num banho de água fria;
Adicionou-se a cada tubo 8,5mL de água destilada para elevar o volume a 10mL;
Levou-se os tubos ao espectrofotômetro, e leu se os valores em %Transmitância, no comprimento de onda de 540nm (λ=540nm) devidamente calibrado o espectro e com o auxilio de uma cubeta;
Construiu-se a curva com o auxilio do Excel.
Preparo do Branco e da Amostra:
Branco:
Utilizou-se 1mL de água como amostra em lugar da solução de glicose e adicionou-se 0,5mL do reagente DNS e levou-se ao banho Maria juntamente com os tubos da curva padrão, e em seguida também foi resfriada em água fria e elevado seu volume com água destilada a 10mL.
Amostra Desconhecida:
Utilizou-se 1mL de amostra convenientemente diluída, e adicionou-se 0,5mL do reagente DNS e levou-se ao banho Maria juntamente com os tubos da curva padrão, e em seguida também foi resfriada em água fria e elevado seu volume com água destilada a 10mL.
RESULTADOS E DISCUSSÕESAbs
Curva padrão de glicose:
Na tabela 1 abaixo estão listados os dados obtidos durante a prática:
	[Conc] (g/L)
	%T
	Abs
	1
	13,7
	0,863279
	0,8
	19,9
	0,701147
	0,6
	32
	0,49485
	0,4
	46,8
	0,329754
	0,2
	78,9
	0,102923
Tabela 1: Dados obtidos durante a construção da curva padrão.
Onde:
[Conc]: é a concentração das amostras padrão nos tubos de ensaio;
%T: é a transmitância lida no espectrofotômetro;
Abs: é a absorbância calculada a partir dos dados de transmitância;
Para se construir a curva padrão de glicose, deve se plotar os dados de Abs x [Conc]. Para isso é necessário se usar da lei de Beer para fazer a transformação de %T em Abs, e isto pode ser descrito pela equação 1 abaixo:
Abs  2  log%T  (1)
O gráfico 1 abaixo demonstra a equação obtida pela plotagem dos dados, e o seu coeficiente de correlação linear:
Gráfico 1: Curva padrão de glicose.[Conc] g/L
1
0,8
0,6
0,4
0,2
0
1
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0
y = 0,8966x - 0,033
R2 = 0,994
Curva Padrão de Glicose
A partir da equação 2 obtida no gráfico, podemos calcular a concentração da amostra desconhecida. Entretanto precisa-se avaliar se a
leitura de %T da amostra desconhecida necessita descontar o valor obtido no branco ou não.
Como o espectro foi calibrado com o branco, e não com água não é necessário fazer esse desconto pois a leitura é feita diretamente. Essa técnica causa mais erros, no entanto é mais direta.
Abaixo na tabela 2 estão os valores lidos para o branco e para a amostra desconhecida.
	
	[Conc] (g/L)
	%T
	Abs
	BRANCO
	0
	100
	0
	AMOSTRA
	?
	21,9
	0,659556
Tabela 2: Dados obtidos durante as leituras do branco e da amostra.
Através da equação 1 o valor de transmitância lido da amostra é convertido em absorbância. O valor encontrado para a absorbância foi tabelado conforme descrito na tabela 2 acima.
Com este valor podemos então pela equação 2 obtida no gráfico encontrar o valor da amostra desconhecida.
y  0,8966x  0,033 0,659556  0,8966x  0,033
x  0,772425
Onde:
x: é o valor da concentração em g/L; y: é o valor da absorbância;
Isto indica que a concentração encontrada da amostra desconhecida é de aproximadamente 0,77g/L de glicose.
CONCLUSÃO
Devido à prática realizada em laboratório percebemos que o método do DNS é uma medida rápida e eficaz. A concentração encontrada na amostra desconhecida foi de 0,77g/L, e pode-se provar que este é um valor bastante confiável visto que o coeficiente de correlação linear foi de 0,994.
O método do DNS é considerado um método barato e conveniente, entretanto a sua especificidade é baixa, podendo haver muitos interferentes durante a identificação da reação. Desta forma é necessário para cada análise construir uma curva padrão para poder minimizar estes possíveis interferentes.