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Modo de Fermentação-Batelada Nádia S. ParachinAula 4 Batelada ou descontínua Substrato Produto [ ] Tempo Biomassa Glicose Etanol Ácidoacético Piruvato Succinato Fermentação alcóolica Fermentação de glicose 0 1 2 3 4 5 6 7 8 0 10 20 30 40 50 60 70 80 0 2 4 6 8 10 13 16 24 30 Bio mas sa & gli cero l (g/ L) Gli cos e & eta nol (g/ L) Tempo (h) glicose etanol glicerol biomassa Tempo (h) Glicose(g/L) Glicerol(g/L) Etanol(g/L) Biomassa(g/L) 0 70,0 0,2 0,0 0,1 24 0,0 7,2 25,0 4,6 Determinação das taxas de consumode substrato e formação de produto • Cálculo das taxas de consumo e produção não sãoconstantes ao longo da fermentação TODAS as taxas crecimento, consumo de substrato e formação de produto devem ser calculadas somente na fase exponencial Como trabalhar com dados de fermentação? 1. Processar os dados vindos do HPLC 2. Calcular taxas e rendimento 3. Verificar a consistência dos dados Componentes do sistema de fermentação Substrato (S) Microrganismo(X) Produto (P1) Produto (P2) Biomassa (x) ΣS+X=ΣP1 + ΣP2 + ΣX Black Box Model Como fica o balanço de massa nesse caso? Black Box Model - Rendimento YS/S YP1/S YP2/S YX/S YS/S = YP1/S +YP2/S + YX/SComo fica o balanço de massa nesse caso? O que eu meço é biologicamente viável? • Começo a minha fermentação com 20g/L de glicose • Produzo 18 g/L de etanol • Produzo 8 g/L de glicerol • Produzo 20g/L de biomassa • Faz sentido? • Temos que de alguma forma medir a quantidade de carbonos que entram como substrato e saem como produto • Normalizamos a fermentação pelo número de carbonos que entram e saem Como fazer o balanço de massas? • Mols de carbono ou C-mols 1 Molécula de Glicose= 6 carbonos1Mol de Glicose = 6 Cmols 1 Molécula de Glicerol= 3 carbonos1Mol de Glicerol = 3 Cmols 1 Molécula de Etanol= 2 carbonos1Mol de Etanol = 2 Cmols Quantos C-mols? • Em 20 g/L de glicose, de glicerol, de etanol, e de biomassa? • Glicose 20 g /30 g.Cmol-1 = 0,66 Cmol • Glicerol 8 g / 30,67 g.Cmol-1 = 0,26 Cmol • Etanol 18 g / 23 g.Cmol-1 = 0,86 Cmol • Biomassa 20g ? Como calcular? Como calcular massamolecular para biomassa? Quantos C-mols? • Em 20 g/L de glicose, de glicerol, de etanol, e de biomassa? • Glicose 20 g /30 g.cmol-1 = 0,66 cmol • Glicerol 8 g / 30,67 g.cmol-1 = 0,26 cmol • Etanol 18 g / 23 g.cmol-1 = 0,86 cmol • Biomassa? 20g/24,33 g.cmol-1 = 0,82 cmol • É fisiologicamente possível? Qual o balanço de massa dessafermentação? Ys/s Qual o valor de Ys/s? Black box model e produtividade rS = rEtOH +rGly + rC + rAc + m Relação entre produtividade volumétrica e rendimento • Lembrando, [P][S]= rs S YP/S = rp/rs Balanço de Carbono Definição: Todo carbono que entra na forma de substrato tem que ser recuperado na forma de produto Estequiometria de bioreatores Os rendimentos em Cmols são os coeficientesestequiométricos da bioconversão Como e por quê utilizamosbalanço de carbono? • Ex: S. cerevisiae crescendo anaerobicamente em glicose 99.2% de carbono recuperado!! Utilizado na validação de dados da fermentação Outro exemplo- previsão de rendimento máximo • Qual o rendimento máximo para produção de etanol em S. cerevisiae? Como calcular o rendimento máximo de etanol a partir de glicose YEtanol/Glicose Máx Glu EtOH + CO2Glu 2 EtOH + 2 CO2 6C 2 x 2C + 2 x 1C YEtanol/Glicose Máx = 0,51 O que acontece quando o balanço de carbono não fecha? 86.4% de carbono recuperado Péssimo Balanço redox (k) • Grau de redução (k): Quantidade de elétrons livresde uma determinada molécula disponíveis paraserem oxidados. Ex: CO2 qual o grau de redução? • O somatório dos graus de redução em umafermentação deve ser zero Definição de níveis redox • Calcule agora o grau de redução dos seguintes compostos: 1. Glicose 2. Etanol 3. Ácido Acético 4. Glicerol Retornando aos nossos dados de fermentação cujo balanço de C não fecha - - Qual o grau de redução do composto que falta? - Quem é o composto que falta? -
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