ISOLAMENTO E CONTAGEM DE LACTOBACILLUS

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Discentes: Naiara Rodrigues, Fellipe Vieira e Felipe Seoane
Docentes: Profª. Ana Cristina e Profª. Mônica Franca
Isolamento e contagem de Lactobacillus
Universidade Federal da Bahia
Instituto de ciências da Saúde
Microbiologia III
Gram positivos
Acidúricos e Acidogênicos
Precisam de sítios retentivos ( fóssulas, fissuras, sulcos...)
Importância desse teste para a Odontologia:
CARACTERÍSTICAS 
O Isolamento e contagem de Lactobacillus da saliva está diretamente proporcional com a atividade de cárie do paciente . 
Coletar aproximadamente 2mL de saliva em uma placa estéril
Retirar 1mL de saliva com a pipeta e realizar diluições seriadas em tubos contendo 9 mL de salina
Colocar o volume a ser semeado (0,1 mL) da diluição 10 -² na placa de Petri e posteriormente colocar o Ágar Rogosa
Submeter a placa a movimentos rotatórios suaves, com a finalidade de misturar o inóculo, com o ágar;
Semeadura: Pour Plate
Esperar solidificar o meio;
Incubar a 37°C por 72 horas
METODOLOGIA
Diluições seriadas
1 mL
Placa de Petri
Volume semeado:
0,1 mL
1\ 10
1\100
Placa contendo 2 mL de saliva
1 mL
Salina 9 mL
Volume a ser semeado: 0,1 mL
Meio seletivo para Lactobacillus: Ágar Rogosa 
- Contém: Ácido acético, pH ácido(5.4) e glicídios (substrato)
Técnica de semeadura: Pour Plate
OBSERVAÇÕES
O objetivo da técnica de semeadura em Pour Plate é obter colônias isoladas (qualitativo) ou para realizar contagem de colônias em placas (quantitativo). Nesta técnica deve-se tomar cuidado para não adicionar o meio em temperatura elevada sobre o inóculo o que poderá matar as bactérias.
RESULTADOS
Colônias Discóides ou em formato de “Alpiste”
Realizar a contagem do número de colônias
-Coloração de GRAM para confirmar se são Lactobacillus
 
N° de colônias= 12
Volume semeado= 0,1mL
Fator de diluição= 1\100 ou 10-²
N°deLactobacillus
Atividade de cárie
0-1000
Negativa ou pequena
1001-5000
leve
5000-10.000
moderada
> 10.000
Alta
ANÁLISE DOS RESULTADOS
JORGE, A. O. Microbiologia bucal
JORGE, A. O. Microbiologia bucal. 1ª ed. São Paulo: Santos, 1995. 121 p.
Referências