Descongelamento de células

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Descongelamento de células 
Preparar o meio de crescimento suplementado com 10% SFB e 1% PSA (PSA = antibióticos + antifúngico - opcional), em quantidade suficiente para ressuspender as células.
Escolher o(s) criotubo(s) que está (estão) armazenado(s) no nitrogênio líquido. 
Descongelar o(s) criotubo(s) no BM a 37(C agitando-o(s) rapidamente [ele(s) irá (irão) descongelar logo!]
Retirar uma alíquota de 50(L (diretamente do criotubo) para realizar a avaliação da viabilidade celular – IMPORTANTE!!!!!!!!!! 
Transferir o restante do conteúdo do criotubo cuidadosamente para uma garrafa de cultura nova já contendo o meio de crescimento 
suplementado [(30 ml para garrafas grandes (150 cm2), (20 ml para garrafas médias (75 cm2) e ( 10ml para garrafas pequenas (25 cm2)].
OPCIONAL: Realizar a centrifugação da suspensão celular para diminuir a concentração de DMSO presente no meio de congelamento:
Transferir o conteúdo do criotubo para um tubo cônico de 15 ml e adicionar meio de crescimento suplementado
[+ 10% SFB + 1% PSA (opcional)] num volume suficiente para 10ml. Em seguida, centrifugar a suspensão celular em velocidade de 1000 rpm (3) por três minutos. Desprezar o sobrenadante e ressuspender novamente as células com (~10ml) do mesmo meio de crescimento. Transferir a suspensão celular para a garrafa de cultura. No caso de garrafas grandes (75 cm2), adicionar meio suficiente para completar ( 25ml.
Incubar a 37(C em estufa de CO2 a 5% até o outro dia. Durante o tempo de incubação, as células deverão formar um tapete. 
Caso as células não tenham sido centrifugadas, trocar o meio no dia seguinte.
Após esse período, realizar a lavagem das células com PBS trocar o meio de crescimento.
Colocar novamente na estufa de CO2 e monitorar o crescimento até confluência.