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FATORES QUE AFETAM O CRESCIMENTO DOS MICRORGANISMOS CRESCIMENTO MICROBIANO Divisão bacteriana Geração N° 1 2 4 8 CURVA DE CRESCIMENTO DE MICRORGANISMOS (bactérias) Fase de aceleração Fase de desaceleração ✓Atividade de água (Aa ou Aw) ✓pH ✓Potencial de oxi-redução (Eh) ✓Conteúdo de nutrientes ✓Compostos antimicrobianos ✓Estruturas biológicas FATORES INTRÍNSECOS: expressão das propriedades físicas e composição química do alimento ✓Temperatura de armazenamento ✓Umidade relativa do meio ambiente ✓Presença de gases no meio ambiente FATORES EXTRÍNSECOS: próprios do ambiente onde se estoca o alimento ✓COMENSALISMO ✓ANTAGONISMO ✓COMPETIÇÃO ✓PARASITISMO FATORES IMPLÍCITOS: INTERAÇÕES ENTRE OS MICRORGANISMOS FATORES INTRÍNSECOS Atividade de água (Aa) O valor de Aa fornece uma indicação segura do teor de água livre do alimento Água livre - única forma de água passível de utilização por parte dos microrganismos Aa = Pv da água no alimento Pv da água pura Pv = pressão de vapor onde Pv = 1 é a pressão de vapor da água pura Aa varia de 0 a 1 Nonocamada fortemente ligada Camada de água ligada e adsorvida Água livre Aa mínima para o crescimento microbiano: Grupos Aw Bactérias deterioradoras 0,9 Leveduras deterioradoras 0,88 Fungos deterioradores 0,80 Bactérias halofílicas 0,75 Fungos xerofílicos 0,65 Leveduras osmofílicas 0,61 Microrganismos ✓ halofílicos – elevada concentração de sal ✓halotolerantes ✓osmofílicos – elevada concentração de açúcares ✓osmotolerantes ✓Xerofílicos – baixa concentração de água ✓xerotolerantes Pressão osmótica: a força com a qual um solvente se movimenta, de uma solução menos concentrada para uma solução mais concentrada, através de uma membrana semi- permeável ESTRESSE OSMÓTICO: ACÚMULO INTRACELULAR DE SOLUTOS COMPATÍVEIS (moléculas que não possuem cargas no pH fisiológico) SOLUTOS COMPATÍVEIS MAIS COMUNS: K+ Atividade de água: alimentos e crescimento microbiano pH > 4,5 = alimentos de baixa acidez 4,0 e 4,5 = alimentos média acidez < 4,0 = alimentos de alta acidez pH = - Log 𝑯 + Como o pH interfere no crescimento microbiano? ❖ Em solução, os ácidos ocorrem em equilíbrio entre os estados dissociado e não dissociado, em função do pH. ❖ O pKa é o valor de pH no qual as concentrações das formas dissociada e não dissociada são iguais. pH pKa 4,20 4,0 5,0 6,0 7,0 Porção não-dissociada (%) 59,3 12,8 1,44 0,14 Ac. sórbico REPRESENTAÇÃO ESQUEMÁTICA DO MODO DE AÇÃO DOS ÁCIDOS E SEUS SAIS. MOLÉCULAS NÃO DISSOCIADAS PERMEIAM A MEMBRANA CITOPLASMÁTICA, ACUMULANDO IONS E INTERROMPENDO A FUNÇÃO CELULAR. AS FONTES DE ENERGIA SÃO GASTAS NO TRANSPORTE DE PRÓTONS PARA O EXTERIOR DA CÉLULA TENTANDO RESTABELECER O pH INTERNO. pH ATPsintase ou ATPase ORGANISMO Mínimo Ótimo máximo Bactérias (maioria) 4,5 6,5-7,5 9,0 Leveduras 1,5-3,5 4,0-6,5 8,0-8,5 Fungos 1,5-3,5 4,5-6,8 8,0-11,0 Clostridium botulinum 4,8-5,0 6,0-8,0 8,5-8,8 Salmonella sp. 4,5-5,0 6,0-7,5 8,0-9,6 ALIMENTO pH ALIMENTO pH Clara de ovo 7,6-9,5 Camarão 6,8-8,2 Peixe 6,6-6,8 Leite 6,3-6,8 Manteiga 6,1-6,4 Mel 6,0-6,8 Carne de Frango 5,5-6,4 Carne bovina 5,3-6,2 Alho 5,3-5,8 Repolho 5,2-6,3 Presunto 3,5-4,0 Abacaxi 3,2-4,1 Laranja 2,8-4,0 Limões 2,2-2,4 Potencial de oxidação-redução (Eh) CAPACIDADE DO SUBSTRATO GANHAR OU PERDER ELÉTRONS ½ O2 + 2 H+ + 2 e - H2O 2H+ + 2 e- H2 +816 mV -421 mV Alta capacidade em ganhar elétrons Alta capacidade em perder elétrons Representação esquemática dos potenciais de oxi-redução Microrganismos Eh de crescimento (em mV) Aeróbios +350 a +500 Anaeróbios +30 a –250 (melhor = - 150) Na ausência de O2 toleram substrato com Eh elevado (+370) Na presença de O2 este limite cai para +100 Aeróbios Facultativos + 100 a + 350 Respiração aeróbica FMN:flavoproteína Q: quinonas Fe/S:proteína ferro enxofre GRUPO NECESSIDADE DE O2 TIPO DE METABOLISMO EXEMPLO HABITAT AERÓBIOS OBRIGATÓRIO Requer níveis atmosféricos Respiração aeróbica Pseudomonas água FACULTATIVO Não requer, mas cresce melhor em presença Respiração aeróbica; anaeróbica e fermentação Escherichia coli Trato gastrointestinal animais homeotérmicos MICROAERÓFILO Requer em níveis inferiores ao atmosférico (5-8%) Respiração aeróbica Campylobacter jejuni Trato gastrointestinal de suínos ANAERÓBIOS AEROTOLERANTE Não requer e não apresenta bom crescimento em sua presença fermentação Clostridium perfringens Solo, alimentos, fezes OBRIGATÓRIO Donoso ou letal Respiração anaeróbica, fermentação Clostridium botulinum solo Aceptores mais comuns: nitrato, íon férrico, sulfato e carbonato Conteúdo de nutrientes Água Fonte de energia – carboidratos, álcoois e gorduras Fonte de nitrogênio – aminoácidos (fonte primária), peptídeos e proteínas Vitaminas (complexo B principal) Minerais Outros fatores de crescimento (nucleotídeos, purinas, pirimidinas, etc) Constituintes antimicrobianos Lactoferrina, sistema lactoperoxidase - leite fresco Lisozima, avidina (biotina), conalbumina (Fe) – clara do ovo Óleos essenciais - vegetais Glucosinolatos (isotiocianatos)- vegetais Estruturas Biológicas Membranas das sementes Cobertura externa dos frutos Casca das nozes Pele dos animais Membranas dos ovos Tecido conectivo (epimísio) FATORES EXTRÍNSECOS Temperatura de armazenamento GRUPO T. MÍNIMA T. ÓTIMA T. MÁXIMA Termófilos Termodúricos 25-42 15 50-80 42-46 60-85 50 Mesófilos 5-15 30-37 35-47 Psicrófilos -15 12-15 15-20 Psicrotróficos -5 20-30 30-35 CURVA DE CRESCIMENTO EM FUNÇÃO DA TEMPERATURA INFLUÊNCIA DA TEMPERATURA NO CRESCIMENTO MESÓFILO -60 -50 -40 -30 -20 -10 -0 Psicrotróficos 0-7C Mesófilos 15-35C Termófilos 43-54C Temperatura (°C) Umidade relativa do meio ambiente A umidade relativa possui estreita relação com a Aa UR = 100 x Aa • ALIMENTO COM Aa < 0,4 SEMPRE IRÁ ABSORVER UMIDADE • ALIMENTO COM 0,4 < Aa < 0,8 IRÁ ABSORVER OU PERDER UMIDADE • ALIMENTO COM Aa > 0,8 SEMPRE PERDERÁ UMIDADE Atmosfera envolvendo o alimento O TIPO DE GAS CIRCUNDANTE AO ALIMENTO IRÁ, PROVAVELMENTE DETERMINAR O TIPO DE MICRORGANISMO DOMINANTE CO2 O2 N2 atmosfera modificada MECANISMO DE AÇÃO: CO2 KING E NIGUEL: bloqueia o metabolismo de Pseudomonas aeruginosa , afetando a descarboxilação enzimática ✓SEARS E EISENBERG: afeta a permeabilidade da membrana celular ✓ENFORTS E MOLIN: acumula na membrana citoplasmática resultando em aumento da fluidez da membrana O CO2 SE DISSOLVE NA FORMA DE HCO -3 CAUSANDO MUDANÇAS NA PERMEABILIDADE CELULAR Interação entre microrganismos • Comensalismo: interação benéfica para uma parte da população e neutra para a outra parte • Amensalismo/Antagonismo: Um organismo produz compostos que inibem o desenvolvimento de outros da comunidade • Competição: interação onde um dos participantes acaba sendo eliminado do meio • Parasitismo: Ataque de uma espécie menor contra uma espécie maior com efeitos negativos para a última (doença/morte) FATORES IMPLÍCITOS