Aula 6 -Eletroforese

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MINISTÉRIO DA EDUCAÇÃO 
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS 
INSTITUTO DE BIOLOGIA 
DEPARTAMENTO DE ZOOLOGIA E GENÉTICA 
 
 
ELETROFORESE 
CARLA MOREIRA- CARLAFARMA@GMAIL.COM 
LABORATÓRIO DE ENGENHARIA GENÉTICA ANIMAL 
 
Eletroforese INTRODUÇÃO 
 
 Técnica de separação de moléculas através de migração 
devido a um diferencial de potencial. 
 
 Tamanho, formato, pH, carga 
 
 Normalmente separar proteínas, DNA, RNA 
 
 Eletroforese em Gel 
 
 Eletroforese Capilar 
 
Eletroforese INTRODUÇÃO 
 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
 Gel de Agarose 
 
 Polissacarídeo extraído de alga marinha 
 
 concentração 0,5 a 2% 
 
 Fácil de preparar 
 
 Não – tóxico 
 
 Baixa resolução 
 
 Voltagem 
 
 Horizontal 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
Cuba de corrida 
Fonte 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
Verte o gel liquido 
Carrega as amostras 
Polimerização 
Eletroforese COMPONENTES 
 
-Agarose 
-Tampão 
- Corante de DNA 
-Buffer 
-DNA/Marcador 
-UV 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
Eletroforese GEL DE AGAROSE 
 
 Gel de Poliacrilamida 
 
 Polímero de ligação cruzada de acrilamida e bisacrilamida 
 
 concentração 3,5 a 20% 
 
 Difícil de preparar 
 
 Tóxico - Acrilamida 
 
 Alta resolução 
 
 Vertical 
 
 Desnaturante 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
 Gel de Poliacrilamida 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
 Gel de Poliacrilamida 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
 Aplicação da amostra 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
- Acrilamida 
- Bisacrilamida 
-Tampão 
- Corante de DNA 
-Buffer 
-DNA/Marcador 
 Componentes 
 
 Gel de Poliacrilamida 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
TINGIMENTO DO GEL 
-Fixação 
-Impregnação 
-Revelação 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA 
Desnaturante 
SDS PAGE 
Bidimensional 
Capilar 
 
Tipos de gel de poliacrilamida 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA DESNATURANTE 
 Formamida 
 SDS 
 β-mercaptoetanol, 
Agentes utilizados 
-Redução das ligações dissulfeto 
entre os resíduos de cisteína. 
 
-Desta forma, todas as proteínas da amostra 
possuirão carga negativa, estarão 
Linearizadas 
 
-Migrarão em direção ao eletrodo positivamente 
carregado. 
 
-A velocidade de migração dependerá 
somente da massa molecular 
 
-Proteínas com menor tamanho passarão mais 
facilmente através da malha 
do gel , portanto, migrarão a uma distância 
maior. 
Promove 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA DESNATURANTE 
Separação em fita simples por formamida e Desnaturação 94° 
 
Eletroforese GEL DE POLIACRILAMIDA DESNATURANTE 
Gel de SDS (SDS-PAGE)- Quando deseja-se separar as proteínas 
somente por tamanho. 
 Poliacrilamida com sulfato dodecil de sódio 
 Proteínas 
Tamanho- Marcador 
Eletroforese GEL DE SDS 
Eletroforese GEL DE SDS- PROTEINAS 
Fraude por adição de leite bovino no leite de caprino 
Leite bovino 100% Leite caprino100% 
0,5 - 1,0 - 2,5 - 5,0 - 10 - 25 
Eletroforese GEL DE BIDIMENSIONAL 
 
Eletroforese GEL DE BIDIMENSIONAL 
 
Eletroforese Capilar 
 Migração em alta velocidade 
 Diminuição do efeito joule 
 Grande Resolução 
 Pouco volume de amostra 
 Sequenciamento 
Eletroforese CAPILAR 
 
Eletroforese Capilar 
Eletroforese CAPILAR 
 
Eletroforese Capilar 
Eletroforese CAPILAR 
 
Eletroforese Capilar utilizado pela empresa Macrogen® Gene EDNRB 
Eletroforese CAPILAR 
 
Oveiro 
Não oveiro 
Não oveiro 
Não oveiro 
Oveiro 
Oveiro 
Não oveiro 
Desta forma esta alteração não está relacionada com o overismo 
 
 
 Conceito de eletroforese 
 
 Tipos de eletroforese 
 
Diga quais os tipos de polímeros utilizados e qual 
é o mais eficiente justificando sua resposta. 
 
Eletroforese QUESTÕES 
 
 Obrigado