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UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS FACULDADE DE ENGENHARIA ENGENHARIA DE ALIMENTOS MICROBIOLOGIA APLICADA À ALIMENTOS AVALIAÇÃO DA EFICIÊNCIA DE SANITIZANTES NA DESINFECÇÃO DE FRUTAS E HORTALIÇAS CLARA SANTA ROSA FIORITI GEOVANE AMARAL DA CUNHA GUILHERME LEONEL MACHADO LUCAS HENRIQUE FARAONI NAIARA APARECIDA DE SOUSA Profª Dr. Cristina Tostes Filgueiras DOURADOS/MS 2019 2 1. INTRODUÇÃO Segundo Pelczar et al. (1997), caracteriza-se fungo como sendo organismos eucarióticos, com parede celular, que alimentam-se por meio de absorção, uma vez que os mesmos não produzem o seu próprio alimento. Os fungos produzem esporos, sendo eles suspensos ao ar. Existem vários tipos de fungos que se distinguem a partir das características dos esporos, natureza do ciclo de vida, bem como suas características morfológicas. Grande parte dos fungos possui filamentos, podendo estes formar um micélio com hifas cenocíticas ou apocíticas. O Penicillium é um gênero de fungo do filo Ascomycota e da família Trichocomaceae. Ele possui septos e os conídios verdes característicos são formados após a divisão mitótica do núcleo. Quando o micélio vegetativo é formado, têm-se as células canidiogênicas. Dentre esse gênero têm-se o P. roqueforti encontrado facilmente na natureza. Morfologicamente é um fungo que rapidamente se reproduz, formando em meios específicos, colônias que vão do verde escuro ao azul, possuindo hifas septadas. O P. roqueforti é visto por muitos pesquisadores como um bom agente de fermentação e que pode agregar características sensoriais particulares, tornando-o o principal ingrediente da produção de queijos, como por exemplo, o Queijo Roquefort (OLIVEIRA, 2018). O P. roqueforti historicamente era o principal contaminador de queijos produzidos em cidades montanhosas da Europa e perpetuavam em cavernas e casas com seus esporos, além disso, em queijarias. Após vários estudos, percebeu-se que o fungo não apresentava nocividade à saúde humana e que conferia aroma e sabor peculiar, isso devido a produção de ácidos graxos convertendo-os em metilcetonas, alcóois secundários e outros compostos aromáticos (OLIVEIRA, 2010). 2. OBJETIVO Desta forma, o objetivo da presente pesquisa foi isolar o fungo Penicillium roqueforti do queijo roquefort comercial, para avaliação e caracterização da sua morfologia. 3 3. MATERIAL E MÉTODOS O procedimento foi realizado no laboratório de microbiologia da Facet, na Universidade Federal da Grande Dourados. Foi realizado o plaqueamento de Penicillium roqueforti retirado de uma amostra de queijo Roquefort, o ágar utilizado foi Batata Dextrose ágar (BDA), realizando furos no meio com auxílio de alça em formato de agulha contaminada com o P. roqueforti. As placas foram mantidas em estufa por 48 horas à 25ºC. Também foi feita a análise de uma cultura em uma placa possuindo fungos de maçã que receberam tratamento com Hipoclorito de Sódio (NaClO). Passadas as 48 horas foi realizada a microscopia das colônias presentes nas placas, para que fosse possível caracterizar o tipo de microrganismos, quanto a sua estrutura e modo de reprodução. 4. RESULTADOS E DISCUSSÃO Após a incubação do meio de cultura por 48 horas à 25ºC foi realizada a comparação entre a placa apenas com o fungo Penicillium roqueforti e uma placa onde haviacrescidoumadiferente cultura, em determinado meio onde foi analisada a atividade antimicrobiana de Hipoclorito de Sódio, como apresentado na imagem 1. 4 Imagem 1. Placas com P. roqueforti, à esquerda sem o tratamento com NaClO e à direita com o tratamento. Fonte: Próprio autor. Foi possível observar um maior crescimento do fungo no meio contendo Hipoclorito, demonstrando a ineficácia desse tipo de de sanitizante no controle de fungos. Na análise de micrografia em meio contendo NaClO foram observados apenas esporos do microrganismo, como apresentado na imagem 2. Segundo PEBERDY (1987), quando cultivado em laboratório o fungo apresenta bom crescimento em meio de cultura sintético ou complexo, como o ágar BDA. Em relação a temperatura, cresce entre 20ºC e 30ºC e o pH 5,0 é considerado ótimo para seu crescimento. 5 Imagem 2. Microfotografia de esporosem ágar BDA com Hipoclorito. Fonte: Próprio autor. Já na placa contendo o Penicillium roqueforti, foi observada a presença do conídio (imagem 3), que forma os esporos através do seu protoplasma, foi possível observar a movimentação dos esporos, caracterizando-os como zoósporos. Imagem 3. Observação dos conídios de P. roqueforti. Fonte: Próprio autor. Os esporângios são formados após divisão nuclear mitótica e são produzidos em cadeia nas filálides e estão fixos nas métulas através dos esterigmas. As células dos Conídióforo Conídios 6 esporângios são formadas após o crescimento do micélio vegetativo do fungo. (GREUTER etal., 2000). Na imagem abaixo são apresentados os esporos classificados como zoósporos. Imagem 4. Microfotografia de zoósporo de P. roqueforti. Fonte: Próprio autor. Em reprodução assexuada o esporo germina formando novas hifas que irão formar o micélio, por sua vez o micélio com aspecto brilhante nutre o fungo com a matéria orgânica. Como fonte de carbono, utiliza mono e dissacarídeos. Pode utilizar também compostos nitrogenados orgânicos ou inorgânico e, necessita também de diferentes fontes de sais para seu crescimentoO crescimento da hifa do Penicillium resulta no aroma característico do queijo roquefort quepela excreção de enzimas como as lipases, participam do desenvolvimento de substâncias que estimulam o aroma, e as proteases que participam da maturação do queijo (PEBERDY, 1987). 5. CONCLUSÃO Conclui-se através do isolamento do Penicillium roqueforti, que ele possui total importância na produção do queijo roqueforti, pois além de a coloração azul-esverdeada de seus conídios caracterizarem a qualidade do queijo, as suas atividades metabólicas de nutrição durante o envelhecimento do queijo provocam um aroma e sabor característico ao produto. 6. REFERÊNCIAS OLIVEIRA, Fernanda de Carvalho. Produção de Lipase por Penicillium Roquefortie sua obtenção na obtenção de aroma de queijo. Dissertação de mestrado. São Paulo, 2010. 7 OLIVEIRA, Polyany Cabral. Produção e Caracterização Física e Química de Endoglucanase de Penicillium Roqueforti Atcc 10110 a Partir de Fermentação em Estado Sólido da Casca da Amêndoa do Cacau. Dissertação de mestrado. Bahia, 2018. PELCZAR, M. J; CHAN, E.C.S; KRIEG, N.R. Microbiologia: conceitos e aplicações. 2 ed. volume 1. São Paulo: editora Pearson, 1997. PEBERDI, F. Biotecnology handbooks: Penicillium and Acremonium. University of Nottingham, England. London: Plenum Press, 1987. GREUTER, W. et al. International Code of Botanical Nomenclature. Kongstein: Koeltz Scientific Books, 2000.
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