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CRESCIMENTO BACTERIANO 24/09/2020 1 CRESCIMENTO MICROBIANO • aumento de tamanho de uma célula individual; • aumento da massa de uma célula individual; • aumento do número de células de uma população; • aumento da massa total de uma população. 24/09/2020 2 FISSÃO BINÁRIA Uma única célula se divide em duas simetricamente, após desenvolver uma parede celular transversal 24/09/2020 3 Reprodução sexuada (transformação, transdução e por conjugação. A partir da troca de informações genéticas entre bactérias TEMPO DE GERAÇÃO • Tempo requerido para uma célula bacteriana duplicar seu DNA e dividir-se por fissão binária. • Em condições ótimas, é igual a 15-20 min. • Varia de acordo com as condições ambientais. Busca ativa: Curva de Crescimento Bacteriano qual a relação das fases de crescimento bacteriano e sintomas clínicos e atividade imunológica? Figura 2 Fatores envolvidos no crescimento bacteriano Fatores Intrínsecos: - Atividade da Água - Acidez e Capacidade tamponante - Potencial Redox (Eh) - Nutrientes - Antimicrobianos Constituintes Naturais dos Alimentos - Estruturas Fatores Extrínsecos: Temperatura - Oxigênio - Vapor d’água - Umidade Relativa - Gases - etc Condições Favoráveis Condições Desfavoráveis ⚫ Quantificação ⚫ Fermentação ou produção de proteínas ⚫ Unicelulares ⚫ requeridas para a preservação dos alimentos. Objetivos do crescimento bacteriano • A maioria dos microrganismos cresce melhor em valores de pH em torno de 7,0 • As bactérias podem ser: Neutrófilas (6,5 e 7,5) Acidófilas Alcalinófilas • Os fungos crescem em pH na faixa de 2,0 a 8,0 • As leveduras crescem entre 4,0 e 4,5 pH ÓTIMO DE CRESCIMENTO 24/09/2020 10 24/09/2020 11 Influência do pH • pH desfavorável ação das enzimas transporte de nutrientes interação entre íons H+ e enzimas na membrana Capacidade do microrganismo de alterar o pH do meio. Bactérias em meio ácido Elevam pH do substrato Ex: Clostridium acetobutylicum Bactérias em meio alcalino Diminuição do pH do meio Ex: Desaminases de aminoácidos Alimento Carne Frango Peixe Leite Clara de ovo Tomate Maçã Banana Milho Alface Cenoura pH 5,5 – 6,2 6,2 – 6,4 6,6 – 6,8 6,3 – 6,5 9,0 –10,0 4,2 – 4,3 2,9 – 3,3 4,5 – 4,7 7,3 6,0 4,9 –6,0 pH nos Alimentos e Bebidas A deterioração microbiana está relacionada com o pH do alimento. http://www.wessel.com.br/html/produtosespeciais.html Potencial de Óxido-Redução (Eh) • É a facilidade com que o substrato perde ou ganha elétrons. substância oxidada substância reduzida Eh positivo Eh negativo Eh de Crescimento de Microrganismos Microrganismo Eh de Crescimento (mv) Aeróbios + 350 a +500 Anaeróbios +30 a –250 (melhor –150) - na ausência de O2 toleram substrato com Eh elevado (+ 370) - na presença de O2 este limite cai para + 100 Anaeróbios Facultativos +100 a +350 bolores, bactérias como a Pseudomonas, Acinetobacter, Moraxella, Micrococcus, algumas espécies de Bacillus e leveduras oxidativas; gêneros Clostridium e Desulfotomaculum leveduras (fermentativas, enterobactérias e Bacillus Microaerófilas; Eh baixo, bactérias lácteas Influência do Eh no Crescimento Microbiano Modificação do Eh do meio pelos microrganismos através de: - Consumo de oxigênio - Produção de H2S pH do substrato Nutrientes • Todos os organismos necessitam de uma variedade de elementos químicos como nutrientes, os quais são necessários para a síntese e funções normais dos componentes celulares. • Principais elementos químicos: carbono, nitrogênio, hidrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo. Nutrientes • Para crescer e funcionar normalmente 24/09/2020 20 água - Aw fonte de energia: açúcar, álcool, aminoácidos fonte de nitrogênio: amino ácidos (a maioria dos microrganismos), mas também: nucleotídeos, peptídeos e proteínas Vitaminas e fatores de crescimento: vitaminas B em pequenas quantidades (Gram + são mais exigentes) Minerais Mofos < leveduras< Bactérias Gram negativas < Bactérias Gram positivas Amido, celulose, gordura • Conteúdo de nutrientes: - Água: - Reações químicas e crescimento microbiano; - Carboidratos: - Açúcares são os elementos energéticos mais empregados; - Utilização de enzimas como amilases, celulases pectinases na degradação dos carboidratos; - Proteínas: - Microrganismos proteolíticos degradam proteínas liberando aminoácidos e peptídeos através da ação de proteases; • Conteúdo de nutrientes: - Água: - Reações químicas e crescimento microbiano; - Carboidratos: - Açúcares são os elementos energéticos mais empregados; - Utilização de enzimas como amilases, celulases pectinases na degradação dos carboidratos; - Proteínas: - Microrganismos proteolíticos degradam proteínas liberando aminoácidos e peptídeos através da ação de proteases; Água: Atividade d’água (Aw) ou Aa • Água: Essencial a qualquer microrganismo, embora as necessidades sejam variadas. É o solvente universal, mas sua disponibilidade é variável (soluções com açúcares ou sais têm menos água disponível). Aw:é a razão entre o vapor da água da amostra e a da água pura à mesma temperatura: • Aw= vapor da água da amostra • Vapor da água pura • Varia de 0 a 1. • Aw: é a medida de água disponível em uma amostra. Os organismos que vivem em ambientes onde a disponibilidade de água é baixa desenvolvem mecanismos para extrair água do ambiente, pelo aumento da concentração de solutos internos, seja bombeando íons para o interior ou sintetizando ou concentrando solutos orgânicos (solutos compatíveis), que podem ser açucares, álcoois ou aminoácidos (prolina, betaine, glicerol). 23 Atividade d’água para o desenvolvimento microbiano • Quanto menor a Aw , menor a disponibilidade de água. • Em geral, as bactérias requerem mais água que os fungos. • As bactérias Gram negativas requerem mais água que as Gram positivas. • Em qualquer temperatura, a habilidade do microrganismo em crescer é reduzida à medida que a Aw diminui. • A presença de nutrientes aumenta a faixa de Aw na qual o m.o. pode crescer. 24/09/2020 24 Exigência: Bactérias> fungos Gram positivas> Gram negativas Resistência a baixas Atividade de Água Microrganismos osmofílicos: baixa Aa: produtos açucarados Microrganismos osmodúricos: suportam altas concentrações de açúcar, porém não se multiplicam.; Microrganismos halofílicos: necessitam, para se desenvolver, de ambientes com elevada concentração salina Microrganismos halodúricos: suportam ambientes com alta concentração de sal Microrganismos xerofílicos: possuem afinidade a ambientes secos. 24/09/2020 25 leveduras tolerantes ao açúcar Pressão osmótica: Pressão osmótica: Fator extremamente importante, principalmente a partir do maior conhecimento sobre as Archaea, visto que vários membros deste domínio requerem altas concentrações de sais para seu desenvolvimento. 26 40 Fatores extrínsecos Constituintes antimicrobianos naturalmente presentes em alimentos: estabilidade 27 cravo Orégano lisozima e co- albumina glucosinobastos: causam injurias e rompimento celular. Alil isotiocianato lactoferrinacoglutinina, lactoperoxidase derivados do acido hidroxicinâmico: atividade antimicrobiana e antifúngica Fatores extrínsecos: Umidade relativa do ar: • Importante do ponto de vista da Aw e crescimento de microrganismos na superfície. • Quando um alimento apresenta Aw 0,6 é importante que este alimento seja estocado sob certas condições nas quais não capte água do meio ambiente externo e assim aumente sua superfície permitindo o crescimento bacteriano. • 28 Alimentos com Aw: UR: O alimento captura umidade até que o equilíbrio seja alcançado. Alimentos com Aw : UR: Perde umidade quando armazenado em ambiente de baixa UR. Temperatura UR Fatores extrínsecos: Umidade relativa do ar24/09/2020 29 Fatores extrínsecos: Preservação de alimentos: controle dos microrganismos • Exaustão • Embalagens impermeáveis ao oxigênio • Uso de vácuo • Atmosfera com gases inertes para se controlar os microrganismos 24/09/2020 30 Fatores extrínsecos: temperatura temperaturas cardinais Temperatura ótima de crescimento: crescem mais rapidamente. A temperatura ótima de crescimento não é a temperatura mediana entre a máxima e a mínima. É a mais próxima do limite superior de variação de temperatura A velocidade das reações enzimáticas aumenta com o aumento da temperatura ate um ponto em que as enzimas são danificadas eplo calor e as células param de crescer. Temperatura máxima de crescimento: reflete os processos de desnaturação de proteínas e ácidos nucléicos, inviabilizando a sobrevivência celular. Temperatura mínima de crescimento: os fatores que determinam a temperatura mínima ainda não são bem conhecidos, embora certamente a fluidez da membrana seja um dos fatores determinantes destes níveis térmicos baixos. 24/09/2020 31 24/09/2020 32 Dentre os diferentes microrganismos observa-se uma ampla variedade de faixas de temperatura, onde para alguns o ótimo encontra-se entre 5 e 10°C, enquanto para outros é de 90 a 100°C. 24 Classificação • Assim, os microrganismos podem ser classificados em quatro grupos, de acordo com os ótimos de temperatura: 33 Baixas temperaturas: psicrófilos Faixa: 0 a 20°C Ótimo: ≈ 15°C Ex.: Flavobacterium Mesófilos: temperatura ambiente faixa: 12 a 45°C Ótimo: 37°C Ex.: E. coli) Termófilos: temperaturas altas Faixa: 42 a 68°C Ótimo; 62°C Ex.: Thermococcus Hipertermófilos: temperaturas muito altas Faixa 80 a 113°C Ótimo: 105°C EX.: Pyrodictium brockii). Tipos de bactérias em relação à temperatura 34 Maioria dos microrganismos marinhos Patogênicos áreas vulcânicas, em mistura de fertilizantes e em nascentes quentes. Bacillus stearothermophilus. Arqueobactérias: Pyrodictium occultum, Pirococcus woesei e Termococcus celer. Psicotolerantes e psicrófilos • Temperatura ótima: entre 10°C e 15°C. • Sobrevivem a 0°C. • São um grupo amplo (bactérias, fungos, algas e protozoários) que podem contaminar alimentos e outros substratos refrigerados. • Sobrevivem /multiplicam-se em ambientes refrigerados, sendo os principais agentes de deterioração de carnes, pescado, ovos, frangos e outros. Nesse grupo podem ser incluídos os seguintes Gêneros: Pseudomonas, Alcaligenes, Flavobacterium, MIcrococcus e outros 24/09/2020 35 Busca ativa: Bactérias dentro do nosso corpo nem sempre são sinal de doença. Muito pelo contrário: cada milímetro quadrado de um intestino saudável deve ter cerca de 10 bilhões de micro-organismos vivendo nele para funcionar corretamente. As bactérias do gênero Lactobacillus não são as mais numerosas, mas têm uma grande vantagem: podem ser ingeridas e ainda chegar vivas ao intestino, atravessando sem problemas o estômago, ambiente onde a maioria dos microrganismos não sobrevive. • Com base nas informações do texto acima, classifique os Lactobacillus quanto a sua temperatura e pH de crescimento. 24/09/2020 36