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EXERCÍCIOS MEDIDAS QUANTITATIVAS DE CRESCIMENTO 1. Para determinar a população bacteriana de uma cultura de Staphylococcus aureus foram retirados 25 ml e colocados em 225 ml de solução salina estéril; em seguida 11 ml dessa diluição foram adicionados em 99 ml do mesmo diluente. Na sequência retirou-se 10 ml dessa diluição e adicionou-se em 90 ml do citado diluente. Dessa última diluição retirou-se novamente 1mL e transferiu-se para 9ml de salina. Considere que foram empregadas as três últimas diluições no método de contagem de células viáveis em placas pela técnica do “spread plate”. Após o período de incubação a 37 °C por 48 horas, o resultado foi o seguinte para as 3 diluições em triplicata: 298, 290 e 276 ; 35, 37 ; 40.e 8,19 e 22.Qual a concentração de S. aureus na suspensão? 2. Foram realizadas diluições sucessivas de uma cultura de Escherichia coli. O volume do inóculo foi de 0,1 ml e após o período de incubação a contagem foi a seguinte: 10 -2 (7054 e 6893); 10 -3 (687 e 632); 10 -4 (406 e 438); 10 -5 (59 e 65); 10 -6 (23 e 18). Qual o número de células viáveis da amostra? 3. Uma cultura de leveduras utilizada num processo industrial fermentativo foi coletada na fase exponencial de crescimento. A contagem total por microscopia numa câmara de Neubauer apresentou na diluição 10 -5 um número médio de 5 células. Qual a concentração de leveduras na amostra original? 4 Um inóculo de mil células de bactérias por ml cresceu em um caldo nutritivo. Após 200 min, a cultura ainda encontrava-se em fase exponencial de crescimento com uma população de um milhão de células. Se o tempo médio de geração dessa bactéria nesse meio é de 20 min, qual a duração da fase lag, se esta ocorreu? 5. Você tem 20 ml de um meio de cultura líquido com 2 x 10 7 células de Proteus vulgaris. Após seis horas a cultura estava na fase logarítmica de crescimento com a população de 7 x 10 7 cél/ml. O tempo médio de geração deste organismo neste meio de cultura é de 40 min. Determine se houve ou não a fase lag. Em caso afirmativo, qual sua duração? 6. Na fase inicial da curva de crescimento de uma cultura de Bacillus subtilis em sistema fechado, você realizou uma contagem de células viáveis em placas (Spread Plate) encontrando um valor médio de 50 colônias nas placas da diluição 10 -6 . Após 200 minutos de incubação e sabendo que a bactéria duplica-se a cada 30 minutos você realizou uma nova contagem em Câmara de Neubauer (1/4000mm 3 ) na diluição 10 -2 encontrando um número médio de 4 células para a população final: Com base nestes dados responda: a) Número de gerações (n)?, b) Tempo de geração, c)Tempo de duração da fase LAG? 7. Suponha que a contagem de células viáveis em placas de uma bactéria A após 05 horas de incubação e 7 gerações apresentou uma média de 238 x 10 5 UFC/mL. Considerando que a referida bactéria duplica-se a cada 20 minutos responda: a) Diluição eu que foi realizada a contagem; b) Tempo da fase log; c) número de células inicial (N0). 8. No preparo de uma torta de creme ocorreu acidentalmente uma contaminação com 18 células de Staphylococcus aureus. Considerando que o tempo de geração desta bactéria é de 45 minutos, quantas células deveriam existir na torta após 8 horas? 9. Uma amostra de 10 mL de água foi diluída em 90 mL de salina esterilizada. A contagem de células foi realizada em Câmara de Neubauer com volume de 1/4000 mm 3 e o número médio de células encontrado foi de 20. Qual o número de bactérias por mL? 10. De acordo com o fabricante, em uma amostra de fermento biológico existem 6,0 x10 12 cél/mL. Este número equivale a uma média de 4 células na Câmara de Neubauer. Qual a diluição indicada para efetuar a contagem desta amostra? Justifique. 11. De uma amostra de água contaminada, 1 mL foi adicionado a 99 mL de salina. A partir desta diluição, realizou-se a contagem em Câmara de Neubauer de volume de 2,5 x 10 -7 mL. O número total de células encontrado foi de 320. Determine o número de células da amostra de água. 12. Suponha que a contagem de células viáveis em placas de uma bactéria A após 05 horas de incubação e 7 gerações apresentou uma média de 238 x 10 5 UFC/mL. Considerando que a referida bactéria duplica-se a cada 20 minutos responde e justifique: a) Diluição eu que foi realizada a contagem; b) Tempo da fase log; c) número de células inicial (No). 13. O crescimento de duas culturas bactérias diferentes após 18 horas de incubação a 37°C foi medido pela contagem de células viáveis em placas nas mesmas condições de cultivo. É possível concluir que as culturas apresentarão o mesmo número de células? Considere hipoteticamente que o inóculo inicial de ambas as culturas foi de uma célula. JUSTIFIQUE SUA RESPOSTA. 14. Considerando as diluições 10 -6 ,10 -7 e 10 -8 foi realizada uma contagem pela técnica do NMP para bactérias do grupo coliforme e os resultados encontrados no teste para coliformes termotolerantes foram os seguintes (em ordem crescente de diluição): 3 tubos positivos; 1tubo positivo; 1tubo positivo. Como você consultaria a tabela de Hoskins? Qual fator de diluição seria utilizado? 15. O resultado final de uma análise de água para coliformes termotolerantes foi o seguinte para cada diluição: 1x10 +++; 1x10 0 ++ -; 1x10 -1 ++ -; 1x10 -2 +- - Analise os dados, apresente a leitura para entrar na tabela de Hoskins e o fator de diluição a ser utilizado. Essa água é considerada potável? Que significa coliforme temotolerante? 16. Se um meio de cultura foi cultivado com 8 x 10 3 UFC/mL no tempo zero, quantas gerações terão ocorrido após 10 horas de incubação com uma população final de 6 x 10 8 UFC/mL? Qual a velocidade de crescimento desta cultura? 17. Considerando as 3 últimas diluições da questão número 1 foi realizada uma contagem pela técnica do NMP para bactérias do grupo coliforme e os resultados encontrados no teste para coliformes termotolerantes foram os seguintes (em ordem crescente de diluição): 3 tubos positivos; 1tubo positivo; 1tubo positivo. Como você consultaria a tabela de Hoskins? Qual fator de diluição seria utilizado?
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