Relatório da Extração do Dna

Prévia do material em texto

EXTRAÇÂO DE DNA – Relatório 
1. Introdução
O primeiro passo é preparar a solução de lise com 50mL de detergente, 15g de NaCl e 900mL de água. Essa etapa vai romper as membranas celulares e nucleares liberando o DNA que está no núcleo das células. A maceração é utilizada para romper as paredes e membranas celulares das células microbianas e ajuda a quebrar as células aumentando superfície de contato com a solução de lise e liberando mais DNA no meio. Com as células maceradas são colocadas em um saco no aparato filtrante e aguardar o tempo de filtração, depois é só transferir parte do conteúdo filtrado para um tubo de ensaio grande, enchendo somente até 1/6 do seu volume total. Adicionar vagarosamente o álcool gelado no tubo até que esteja alcance metade de sua capacidade. O DNA é pouco solúvel em álcool, ele sofre um processo de desidratação deixando suas moléculas mais compactadas, além disso o DNA possui uma densidade menor do que os demais componentes celulares e isso faz com que ele vá para a superfície da solução. Depois, álcool (isopropanol ou etanol) e sal (NaCl) são adicionados à fase aquosa. O DNA na presença de sal e álcool forma um precipitado frequentemente visível que pode ser “pescado” ou “peletizado”.
2. Roteiro da prática
- Saco plástico tipo "zip lock"ou copo e pistilo para macerar; 
- Morangos (em temperatura ambiente); 
- Solução de extração de DNA (50mL de detergente, 15g de NaCl (sal comum) e 900mL de água); 
- Aparato filtrante: filtro de papel com funil ou gaze com funil ou peneira; 
- Álcool etílico gelado (92° ou 96°GL); 
- Tubo de ensaio grande ou proveta; 
- Bastão de vidro. 
3. Conclusão da prática
A importância do álcool: quando adicionado na etapa, faz o DNA aglutinar e se unir, formando uma massa filamentosa e esbranquiçada. Após esse passo, é possível vermos o DNA no topo do recipiente. 
A importância do detergente: Ele tem a função de romper a bicamada lipídica que está na membrana celular. Com a destruição dessa camada pelo detergente o citoplasma é liberado e permanece no suco diluído.
A importância do sal: A adição do sal (NaCl) no início da experiência proporciona ao DNA um ambiente favorável. O sal contribui com íons positivos e negativos. Outro fato, é que o sal aumenta a densidade do meio, facilitando a migração do DNA para o álcool.
Utilizando um método simples, várias etapas acabaram com a extração dessa molécula. Na primeira, foi possível ver a destruição da pare de celulósica que envolve a célula vegetal. Já na segunda, o detergente foi responsável pelo rompimento da membrana citoplasmática e da liberação do DNA no suco. Assim, com a adição do álcool, foi possível separar essa molécula do resto do suco. Com esse experimento, provamos a existência do DNA através dos resultados obtidos.
4. Referências 
REGINA S. C. ANTONINI, PERISSATTO S. MENEGHIN, SEIITI A. URASHIMA. Técnicas Básicas de Biologia Molecular, Araras, SP, UFSC, 2004, 57p.
FERREIRA, M.E., GRATTAPAGLIA, D. Introdução ao uso de marcadores
moleculares em análise genética. Brasília: EMBRAPA-CENARGEM, 1995.
220p.