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3- Amilase salivar Preparo da amilase acida • Colocou-se 30ml do amido a 1% em um Erlenmeyer e adicionou-se 3ml do ácido clorídrico – HCl, homogeneizou-se a mistura. Tubos da amilase ácida - Separou-se 3 tubos de ensaio: AA1, AA2 e AA3; - Em cada tubo acrescentou-se 5ml de água destilada e 5ml de solução de amilase ácida; • AA1: foi colocado diretamente no banho de gelo; • AA2: foi colocado no banho maria a 100°C, após 10 minutos foi colocado no banho de gelo; • AA3: foi colocado no banho maria a 100°C, após 20 minutos foi colocado no banho de gelo; RESULTADOS Retirou-se todos os tubos do banho de gelo, aguardou a volta para temperatura ambiente e adicionou-se 10 gotas de lugol em cada tubo; • AA1: ÚNICO que ocorreu a hidrolise do amido>>lugol não se misturou e formou duas camadas, uma nuvem branca e a camada escura; • AA2 e AA3: o amido permaneceu integro porque a alta temperatura desnaturou a amilase ácida, então o lugol se misturou e formou-se uma única camada. Preparo da amilase enzimática • Colocou-se 30ml de amido a 1% em um Erlenmeyer e adicionou-se 1 ml de solução salina (1ml de saliva e 9ml de solução salina) Tubos da amilase enzimática - Separou-se 3 tubos de ensaio também: AE1, Ae2 e AE3; - Em cada tubo acrescentou-se 5ml de água destilada e 5ml de solução de amilase enzimática; • AE1: foi colocado diretamente no banho de gelo; • AE2: manteve em temperatura ambiente por 10 minutos e colocou-se no banho de gelo; • AE3: manteve-o em temperatura ambiente por 20 minutos e colocou-se no banho de gelo; RESULTADOS Retirou-se todos os tubos do banho de gele e esperou a volta para a temperatura ambiente também, logo após adicionou-se 10 gotas de lugol em cada tubo; • Em todos os tubos ocorreu a formação de duas camadas, a nuvem branca de amido e de lugol; ***Nos casos em que houve a desnaturação da amilase, o lugol corou o amido devido ao iodo presente em sua composição, ele entra entre as hélices do amido. 4- A desnaturação ocorre quando a proteína perde sua formação tridimensional, ou seja, quando sua estrutura quaternária é perdida. A temperatura é uma das causas da desnaturação proteica já que as enzimas possuem uma faixa curta de variação de temperatura, e caso ultrapassado, causa alterações nas estruturas enzimáticas.
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