Determinação colorimétrica pela reação de biureto

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Universidade Federal de Goiás
 Instituto de Ciências Biológicas
 Curso de Biomedicina
Determinação Colorimétrica pela reação de Biureto
Discente:
Renata Marques De Souza Kran
Goiânia
2017
Renata Marques De Souza Kran
Determinação Colorimétrica pela reação de Biureto
Relatório requerido pela disciplina de Bioquímica 
Ministrada pelo Professora: Rosália Santos Amorim Jesuino
Goiânia
2017
6
Sumário 
1 Introdução……………………........………………………………..04
2 Materiais e Métodos.........……………………….........................04
3 Resultados e Discussões…………………………………….......05
4 Conclusão........…………............................................................05
5 Referências bibliográficas…...……….......................................06
1 Introdução
	As proteínas pertencem à classe dos peptídeos, pois são formadas por aminoácidos ligados entre si por ligações peptídicas. Uma ligação peptídica é a união do grupo amino (-NH2-) de um aminoácido com o grupo carboxila (-COOH-) de outro aminoácido, através da formação de uma amida. São muito importantes, pois possuem diversas funções no organismo. Todas as enzimas conhecidas, por exemplo, são proteínas e estas catalisam diversas reações metabólicas. 
	O biureto é uma substância formada pela mistura de cobre, hidróxido de sódio e um complexo que estabiliza essa mistura. Dessa forma, quando em solução que contenha proteínas, essas formam um complexo púrpuro, em soluções salina, uma vez que o íon cobre se liga ao nitrogênio dos aminoácidos. Assim, podemos estimar a concentração da solução que contenha proteínas, quando colocamos a amostra em um espectrofotômetro, emitindo luz monocromática de comprimento de onda de 530 nm. 
	A reação do Biureto é utilizada para identificar a presença de proteínas em materiais biológicos, como também para quantificá-las, uma vez que o complexo cobre-proteínaapresenta uma absorção máxima 53 0nm. A intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de proteína. Para que a reação do Biureto seja positiva há necessidade da presença de pelo menos duasligações peptídicas na molécula, portanto, aminoácidos e peptídeos não dão reação do Biureto positiva. 
	O experimento realizado em aula pratica teve como objetivo quantificar-se colorimetricamente a proteína presente em uma amostra de concentração desconhecida, usando os conhecimentos adquiridos nas aulas de espectrofotometria.
OBJETIVO
	Quantificar colorimetricamente a proteína presente em uma amostra de concentração desconhecida, usando os conhecimentos adquiridos nas aulas de espectrofotometria.
2 Materiais e Métodos
Materiais 
· 5 tubos de ensaio pequenos
· Caseína 1%
· Glicina 1%
· NaOH 1,0 Mol/L
· Reativo de Bureto (sulfato de cobre 0,5%).
· Espectrofotômetro
· Agitador de tubos (vórtex)
Metodologia
	Identificou se 5 tubos de ensaio o primeiro é o branco, o segundo possuía a glicina e os restantes forma enumerar de 1 a 3; Adicionou se 1 mL de água destilada no tubo denominado de branco; No tubo glicina colocou se 1 mL de solução de glicina; Adicionou se 0,2 mL de caseína no tubo 1; 0,6 mL no tubo 2 e 1 mL no tubo 3; Nos tubos 1 a 2 completou se o volume para 1 mL com água destilada e Adicionou se 3 mL de NaOH 1,0 mol/L em todos os tubos.
Adicionou se 0,4 mL de Biureto em todos os tubos; Aguardar 15 minutos enquanto a reação se processa.
Logo após levou se ao espectrofotômetro todas as soluções que foram lidas a 530 nm e anotou se as leituras das absorbâncias de cada tubo de ensaio.
3 Resultados e Discussões
Após a leitura no espectrofotômetro anotou se os seguintes dados:
	Reativos
	Tubos
	
	B
	G
	1
	2
	3
	Água destilada (mL)
	1,0
	--
	--
	--
	--
	Solução de glicina (mL)
	--
	1,0
	--
	--
	--
	Solução de caseína 1%
(mL)
	--
	--
	0,2
	0,6
	1,0
	Água destilada (mL)
	--
	--
	0,8
	0,4
	--
	NaOH 1,0 mol/L
	3,0
	3,0
	3,0
	3,0
	3,0
	Reativo de Biureto 
	0,4
	0,4
	0,4
	0,4
	0,4
	Agitar e aguardar 15 minutos
	RESULTADO (Absorbância)
	0
	0,025
	0,132
	0,124
	0,191
OBS.: As soluções devem ser lidas a 530 nm.
4 Conclusão
	A pratica de fundamenta no fato de que a reação do biureto pode ser utilizada para demonstrar a presença de proteínas em materiais biológicos, como também para quantificá-las, uma vez que o complexo Cu-proteínas apresenta um absorção máxima a 530nm, a intensidade da cor depende exclusivamente da concentração de proteína, já que as ligações peptídicas aparecem com frequência por grama do material analisado.
Apesar de não ser um teste muito sensível (1 a 10mg de proteína), a reação do cj é largamente utilizada em dosagens rotineiras, pois está menos sujeita a interferência de contaminantes normalmente presentes nas amostras biológicas.
5 Referências bibliográficas
LEHNINGHER, Arthur. et al. Princípios de Bioquímica. 2 ed. São Paulo: Sarvier Editora, 1995.
ABS X CONCENTRAÇÃO
abs	Tubo B	Tubo G	Tubo 1	Tubo 2	Tubo 3	0	2.5000000000000001E-2	0.13200000000000001	0.124	0.191