REAÇÃO DE CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS

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REAÇÃO DE CARACTERIZAÇÃO DE PROTEÍNAS
** Resumo baseado em aula**
Promoção de reação para poder gerar cor e assim identificar se
há presença de proteínas.
Reações gerais:identifica proteínas em geral, se há proteína
em solução e quantificar a quantidade existente
● Reação da Ninhidrina: essa reação ocorre no amino grupo,
portanto, todas proteínas possuem um amino grupo
disponível, logo, a reação será positiva. O reagente irá
reagir com o amino grupo, podendo gerar resultados
positivos para aminoácidos. O complexo formado tem cor
púrpura.
Quando há prolina( aminogrupo no radical) forma-se um
produto de cor amarelada.
● Reação do biureto: essa reação identifica as ligações
peptídicas. Esse reagente produz cor, portanto quanto
mais forte a cor, mais proteína está presente no meio. O
reativo de biureto possui cobre que irá reagir com o
nitrogênio das ligações peptídicas formando assim um
complexo que possui uma cor violeta.Inicialmente, a cor é
azulada. Para dar positivo tem que ter ao menos 2
ligações peptídicas (ou seja, tripeptídeo)
Reações específicas: esse tipo de reação é específica para
determinados aminoácidos- específicos.
● Reação de hopkins cole- Thr: reação de identificação do
triptofano, usa-se o ácido glioxílico em pH ácido
(portanto, coloca-se H2SO4 na parede do tubo- que vai
desnaturar a proteína)forma-se um composto de cor
púrpura. A reação gera um tubo fracionado em fases.
● Reação de Sakaguchi- Arg: usa-se o naftol que irá reagir
com a arginina e ocorre, desta forma, um composto de cor
vermelha.
● Reação de millon: Tyr
● Reação de Pauly: Tyr e Hys
● Reação xantoproteica: aa aromáticos
PRECIPITAÇÃO COM DESNATURAÇÃO
Precipitar: tornar-se insolúvel.
Em proteínas, a precipitação pode ser com desnaturação ou
sem desnaturação.
Quando a proteína desnatura, ela perde a solubilidade,
devido sua estrutura complexa.
Meios/fatores que realizam a desnaturação:
● Calor
● Ácidos fortes
● Metais pesados
● Agitação mecânica
PRECIPITAÇÃO SEM DESNATURAÇÃO
● Salting-in (precipitação) /Salting-out (ressolubilização)
● Usa-se um sal com alta força iônica: sulfato de amônia,
que quando colocado em uma proteína, essa precipita.
● Não ocorre alteração na estrutura, pois o sal age
“roubando” a camada de solvatação da proteína (a capa de
moléculas de água que interagem com a proteína).Isso
ocorre pois a água, por osmose, preferirá se ligar ao
sal. Quando essa camada é retirada, portanto, a proteína
precipita.
● Devido a interação entre proteínas, ocorre a formação de
um precipitado.
● Não há perda de função.
● Para refazer a camada de solvatação, é só inserir mais
água no meio, deixando o sal menos concentrado, portanto,
a camada se refará.
● Técnica usada para separar proteínas e purificar.