Slides - Métodos Analíticos de Determinação de Carboidratos

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Métodos Analíticos de 
Determinação de 
Carboidratos
Inúmeros métodos, baseados em princípios distintos,
indicados em situações distintas.
Quantificação em matérias primas, produtos e
acompanhamento dos processos.
Métodos analíticos em carboidratos -
generalidades
Refração é o fenômeno que ocorre quando um raio luminoso
atravessa obliquamente um meio (1) e passa para outro de
densidade diferente (meio 2), alterando sua direção, sendo
proporcional à concentração do componente dissolvido em 2.
O número de °Brix de uma solução corresponde à quantidade de
sólidos solubilizados na solução, em massa de sólidos pela massa
de solução (% m/m). Então se uma solução de 100 g possui 20
°Brix, significa que essa solução é formada por 20 g de sólidos
solúveis e 80 g de solvente.
Métodos analíticos em carboidratos -
refratometria
Esta técnica é aplicada em medidas rápidas tais como em 
frutas, geleias, caldas e mostos.
Métodos analíticos em carboidratos -
refratometria
Fonte: https://www.conexaoimportbrasil.com.br/
Existem refratômetros analógicos, digitais e on line.
Métodos analíticos em carboidratos -
espectrofotometria (poder redutor)
Quando um feixe de radiação de comprimento de onda definido
e de intensidade Io incide sobre uma amostra, uma parte desta
energia é absorvida (Ia), uma parte é transmitida (It) e outra é
refletida ou espalhada (Ir) (Bergamin Filho et al., 2010).
Sob o ponto de vista de instrumental, Ir pode ser mantido
constante fixando-se as condições de medida e evitando a
presença de sólidos em suspensão. Nestas condições, a absorção
da radiação dependerá do caminho percorrido no meio
absorvente (caminho óptico) e da concentração da espécie, ou
seja, do número total de espécies absorventes que interagem
com o feixe de Io (Bergamin Filho et al., 2010).
Lei de Beer
A relação entre absorbância e concentração é estabelecida
através de uma curva padrão de uma substância de referência.
Reação do ácido 3,5-DNS com a glicose
Métodos analíticos em carboidratos -
espectrofotometria (poder redutor)
Obedece a Lei de Beer
Absorve em 540 nmÁcido 3,5-DNS Glicose
Certos açúcares como a sacarose, outros oligossacarídeos e
polissacarídeos, em seu estado natural, são não-redutores. Neste caso, a
amostra precisa ser hidrolisada, convertendo-os em açúcares redutores.
Quando açúcares são dosados em uma amostra não submetida à
hidrólise, o resultado corresponde aos açúcares redutores naturalmente
presentes na amostra (AR). Após a hidrólise são obtidos os açúcares
redutores totais (ART), expressos geralmente como glicose. Os açúcares
não redutores (ARN) são obtidos pela diferença entre ART e AR e
comumente expressos como sacarose ou amido, dependendo da amostra.
Sujeita a inúmeros interferentes. Preparo de material. Faixas restritas
de linearidade. Fator humano.
Métodos analíticos em carboidratos -
espectrofotometria (poder redutor)
Métodos analíticos em carboidratos -
espectrofotometria (métodos 
enzimáticos)
Método baseado no uso de um kit enzimático (em geral um pool
de enzimas), envolvendo a formação de um produto de reação
quantificável por espectrofotometria, com a vantagem de ser
uma reação altamente específica, sem a influência de
interferentes.
Um exemplo é o kit para determinação de glicose, por exemplo
usado em diagnóstico.
Glicose + O2 + H2O ácido glicônico + H2O2
GOD
H2O2 + 4-aminoantipirina + fenol Antipirilquinonimina + H2O
POD
505 nm
Controle de qualidade: Envolve a caracterização de matérias-primas para
fins de processamento e verificação se determinado produto está dentro
dos parâmetros/padrões exigidos pela legislação.
Indústria açucareira: A análise de AR detecta a inversão no
processamento da cana de açúcar (o AR no caldo atinge valores elevados).
É possível, ainda, pela análise de diversos pontos do processo, localizar a
inversão, tomando-se precauções (correção de pH, por exemplo).
Acompanhamento de cultivos microbianos: Permite a verificação das taxas
de consumo de açúcar pelo micro-organismo, necessárias à compreensão
da cinética do processo.
Métodos analíticos em carboidratos -
espectrofotometria
Rendimento, eficiência e perdas em processos
Métodos analíticos em carboidratos –
cromatografia líquida de alta eficiência 
Fonte: http://graduandosfarmacia.blogspot.com/2014/03/
A cromatografia líquida de alto eficiência (CLAE) é uma técnica
usada para separar os diferentes componentes de uma amostra
baseada na diferença de interação entre os componentes da
mistura com a fase estacionária e a fase móvel.
Quantificação individual dos
componentes, maior precisão,
sensibilidade, rapidez, redução do
fator humano, gerenciamento dos
dados, mas exige um alto
investimento.
Métodos analíticos em carboidratos -
CLAE
Fonte: https://www.shodex.com/en/dc/03/02/10.html