Aula 2 - Preparações cromossômicas

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Obtenção de cromossomos 
metafásicos mitóticos
Cromatina x ciclo celular
Célula animal
Mov
12-15 horas
10-12 horas
3-5 horas
1hora
(fibroblasto)
Preparação direta
- escolha de tecido com alto índice mitótico
- tratamento com antimitótico
- fixação
- rompimento da membrana celular e espalhamento dos crs.
(esmagamento, espalhamento, gotejamento)
Preparação indireta (cultivos de curta e longa duração)
� Obtida após germinação a partir de 
sementes, bulbos e caule 
� Obtida de plantas 
Tecidos vegetais com alto índice mitótico
�Meristemas:
- Raiz
- brotos foliares
- outros órgãos em crescimento (gavinhas, pétalas, embrião)
radícula
Tratamento com antimitótico
� Imersão em colchicina 
(0,01-0,5%) por algumas horas
� Imersão em 8-hidroxiquinoleína 
(0,02M) por várias horas
www.life.illinois.edu/.../08mit&veg102.html
Técnica de Esmagamento (squash)
� Fixação com etanol: ácido acético (3:1)
� Tratamento com HCl
� Esmagamento (com corante ou sem)
Crotalaria juncea - Cuco et al., 2003
Citogenética animal
Preparação direta:
� gânglio cerebral (pupas de insetos) – técnica de esmagamento
� embrião
Preparação direta:
� gânglio cerebral (pupas de insetos) – técnica de esmagamento
� embrião
� bulbo de pena 
Células do bulbo são desagregadas mecanicamente
Preparação direta:
� gânglio cerebral (larva de insetos) – técnica de espalhamento
� embrião
� bulbo de pena 
�medula óssea
� baço
� rim anterior (peixe)
� epitélio intestinal
Inoculação de fermento e deInoculação de fermento e de colchicinacolchicina
Processamento dos espécimes anestesiadosProcessamento dos espécimes anestesiados
Remoção dos órgãos de interesseRemoção dos órgãos de interesse
Exposição do epitélio intestinalExposição do epitélio intestinal
Hipotonização Hipotonização com com citrato citrato de sódiode sódio
Fragmentação do baçoFragmentação do baço Raspagem do epitélio intestinalRaspagem do epitélio intestinal
Em fixador (metanol-ácido acético – 3:1)
Espalhamento das células Espalhamento das células -- suspensão celular homogênea suspensão celular homogênea 
Fixador Fixador é trocado e material é armazenadoé trocado e material é armazenado
Cultivo celular rápido:
� rim anterior de peixe (cerca de 16 horas de cultivo)
� linfócitos (vertebrados)
Coleta de sangue da veia anal
Cultura de longa duração
� Fibroblasto (a partir de pele, pulmão, etc.)
- desagregação enzimática do tecido
Cultura de longa duração
� Fibroblasto (a partir de pele, pulmão, etc.)
- desagregação enzimática do tecido
- desagregação mecânica do tecido (técnica de explante)
Crescimento celular em torno de explantes
Physalaemus cuvieri
Cultura de longa duração
� Fibroblasto (a partir de pele, pulmão, etc.)
- desagregação enzimática do tecido (com colagenase)
- desagregação mecânica do tecido (técnica de explante)
� Fibroblasto derivado de líquido amniótico
14a semana de gestação
� Tumores sólidos
Sincronização em S com metotrexato ou aminopterina
Síntese de timidina a partir de folato é bloqueada
Replicação do DNA pára;
Ciclo celular é interrompido em S
� Técnica de esmagamento
� Técnica de espalhamento
� Técnica de gotejamento de 
suspensão celular 
� Preparação direta
� Preparação indireta (cultivos de curta e longa duração)
Células em divisão
Células em metáfase
(colchicina)
Tramento hipotônico
Fixação
(Metanol / Ác. Acético 3:1)
Suspensão celular gotejada em lâminas
Tratamento com antimitótico
Células inchadas
Células em divisão
Células em metáfase
(colchicina)
Tramento hipotônico
excessivo
Tratamento com antimitótico
Pouco tempo em 
solução hipotônica
Ramphastos toco (≅ 114 crs.)
Metáfase humana