Determinacao_de_lipideos-Metodologia

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DETERMINAÇÃO DA GORDURA BRUTA (LIPÍDEOS)
OU EXTRATO ETÉREO
1 Considerações Gerais:
- Encontradas nos tec. Animais (Tecido adiposo)
- Em tecidos vegetais (sementes, frutos)
- Insolúveis em água
- Solúveis em solventes orgânicos: (EXTRATORES)
- éter de petróleo - Benzeno
- Éter etílico - Outros solv. orgânicos
- Clorofórmio
2. Metodologia de Análise
O tempo de extração é variável, dependendo do 
tipo de produto analisado
2.1 Extração com solvente a quente:
Fundamento: Baseado em três etapas:
A. Extração da gordura com solvente
B. Eliminação do solvente por evaporação
c. A porção extraída é quantificada por pesagem
Características da extração a quente:
- A escolha do solvente vai depender dos 
componentes lipídicos existentes no alimento (amostra)
- A extração com solvente é mais eficiente quando 
a amostra é seca antes da análise (MS). Obtêm maior 
penetração do solvente
- A preparação da amostra deve ser cuidadosa 
evitando sua degradação.
- É necessário um controle de temperatura e do 
tempo de exposição do material no solvente
Eficiência da extração a quente:
Fatores de influência:
- Natureza do material a ser extraído
- Tamanho da partícula
- Natureza do solvente: a água quando presente
Dificulta penetração do solvente
- Semelhança entre polaridades do solvente e amostra
- Ligação dos lipídeos com outros componentes da 
amostra
- Circulação do solvente através da amostra
- A velocidade do refluxo deve ser adequada
- Quantidade relativa de solvente adequada
Tipos de solventes (extratores)
Mais utilizados: - Éter de Petróleo
- Éter etílico
Éter Etílico:
- Solvente de extração mais ampla, extrai vitaminas, 
esteróides, resinas e pigmentos. O que se constitui um erro 
quando se deseja determinar somente gordura (TAG).
- Mais caro, perigoso, pode acumular água durante 
extração o que vai dissolver materiais não lipídicos.
Éter de petróleo: 
- Mais usado. 
Conclusão: Em alguns casos usa-se mistura de solventes.
Tipos de Equipamentos
a. SOXHLET
Características:
- É um extrator que utiliza refluxo de solvente
- O processo de extração é intermitente
- Pode ser utilizado somente com amostras sólidas
- Tem a vantagem de evitar temperaturas altas de ebulição 
do solvente, a amostra não fica em contato com o 
solvente, evitando assim decomposição da gordura da 
amostra
- A quantidade do solvente é maior porque o vol. Total 
tem que ser suficiente para sifonar
- Tem a desvantagem da possível saturação do solvente 
que permanece em contato com a amostra
b. Goldfish
Características:
-É um método que utiliza refluxo de solventes para 
extração.
- O processo de extração é contínuo e, portanto, mais 
rápido
- Pode ser utilizado somente com amostras sólidas
- Tem a desvantagem do contato com o solvente 
muito quente com a amostra, o que pode acarreta 
degradação da gordura.
- Tem a vantagem de utilizar menos solvente e ser 
mais rápido, pois o método, sendo contínuo, a 
amostra permanece em contato com o solvente.
2.2 Extração com mistura de solventes a frio-
Método de Bligh-Dyer- 1959
Fundamento: 
Consiste na extração da gordura a frio em que utiliza-se a 
mistura de três solventes:
Clorofórmio: Metanol : Água
Clorofórmio: contêm os lipídeos
Metano l + Água: Substâncias não lipídicas
Vantagens:
- Extraem todas as classes de lipídeos, inclusive os 
polares, importantes nas avaliações dietéticas
- Os lipídeos são extraídos sem aquecimento, e os 
extratos podem ser utilizados para avaliação de 
deterioração dos lipídeos através dos índices de 
peróxidos e ácidos graxos livres, além dos teores de 
carotenóides, vitaminas, esteróis.
- Pode ser utilizado em Matéria integral (com altos 
teores de umidade).
- Não necessita de equipamentos sofisticados e 
especializados
2.3 Extração da gordura ligada a outros compostos, por 
hidrólise ácida e alcalina
Utilizados em produtos onde a gordura está ligada a 
proteínas e carboidratos , pães, leite e derivados.
A liberação da gordura é feita por uma hidrólise ácida 
ou alcalina.
A. Hidrólise ácida
A.1. Processo de Gerber
- É um método de rotina utilizado somente para leite e 
derivados
- A gordura no leite está presente em forma de emulsão 
de óleo e água, cercada por um filme de proteínas
- -E necessário quebrar esse filme para extração da 
gordura
- Para tal a amostra é adicionada de ácido sulfúrico e 
álcool isoamílico para facilitar a hidrólise e separação 
da gordura e reduzir o efeito de carbonização do ácido 
sobre a gordura.
- Após digestão a amostra é centrifugada num tubo 
chamado de BUTIRÔMETRO.
Requisitos importante do 
Método de Gerber:
-O H2SO4 deve ter densidade de 1,82 ou seja 
diluído.
-A leitura final da gordura no butirômetro deve 
ser feita a 70 °C
A.2 Processo de Babcock
-Utiliza também ácido Sulfúrico para hidrólise da 
proteína
- Difere do Gerber quanto a quantidade de amostra e 
ácido sulfúrico adicionado e na adição de água quente 
em vez de álcool isoamílico.
-Mais demorado, 2 a 3 vezes que o de Gerber
Observação: Nenhum dos métodos determina 
fosfolipídeos para tal usa-se Soxhlet ou de Goldfish
B. Hidrólise Alcalina 
– Método de Rose-Gottlieb e Mojonnier
-Neste a amostra é tratada com Hidróxido de amônia e 
álcool para hidrolisar a ligação proteína-gordura
- A gordura separada é extraída com éter de petróleo ou 
etílico
- O álcool precipita a proteína, que é dissolvida na amônia, 
e a gordura separada pode ser extraída com éter.
- A extração com éter de petróleo é eficiente em amostras 
com muito açúcar (leite condensado), Bebidas lácteas, etc