Diagnóstico molecular I

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Diagnóstico Molecular I
Diagnóstico laboratorial
direta (agente etiológico)
detecção
indireta (antígeno ou anticorpo)
Detecção direta
Exame microscópico:
- visualização direta do agente em espécimes 
clínicos
“poderá gerar confusão ou erro de diagnóstico 
como decorrência da morfologia alterada”
Detecção direta
Cultivo:
- identificação por características fisiológicas 
e bioquímicas
“organismos de crescimento lento ou 
ausência de crescimento"
Detecção indireta
Sorodiagnóstico:
- detecção de antígenos constituintes do
agente etiológico
“possibilidade de resultado falso-positivo
por similaridade antigênica”
Detecção indireta
Sorodiagnóstico:
- detecção de anticorpos específicos para 
o agente etiológico
“possibilidade de resultado falso-negativo
por baixa concentração de anticorpos”
Diagnóstico molecular
Métodos clássicos
“negativos” “inconclusivos”
marcador molecular
Diagnóstico molecular
- sensibilidade (um DNA genômico)
- especificidade (marcador molecular)
- rapidez (diagnóstico precoce)
Diagnóstico molecular
Fatores considerados:
- primers para região conservada
- alvo gênico multicópia
- identificação a nível de espécie
Diagnóstico molecular
- Resultados falsamente positivo:
contaminação por amplicons de outro
paciente
- Resultados falsamente negativo:
presença de inibidores (Hb e heparina)
Diagnóstico molecular 
Protocolo de diagnóstico molecular:
- Preparo da amostra:
extração de ácidos nucléicos
- Metodologia molecular:
amplificação e ou hibridização
- Análise molecular:
eletroforese e ou hibridização
Diagnóstico laboratorial molecular
DNA ou RNA
diagnóstico
esquema terapêutico
monitoramento
Diagnóstico molecular 
validação do método
padronizados “in house”
(FDA ou OMS) (laboratório)
acurácia, precisão,
sensibilidade e especificidade
Biologia molecular aplicada a microbiologia
Tuberculose:
- Sonda molecular para rDNA de 
M. tuberculosis e Micobactérias atípicas
Baixa sensibilidade quando há [DNA]
Biologia molecular aplicada a microbiologia
Tuberculose (Mycobacterium tuberculosis)
- Amplificação de DNA teste Amplicor (Roche)
- Amplificação de RNA teste EMTD (Gen-Probe)
Pacientes com suspeita de tuberculose pulmonar 
não infectados pelo HIV
Teste Amplicor ou AMTD
Teste Amplicor ou AMTD
Teste EMTD ou Gen-Probe
sonda DNA éster de acridina
isotérmico
37°C
AMPLICOR X EMTD
Biologia molecular aplicada a microbiologia
Chlamydia trachomatis
- Amplificação de DNA teste Amplicor (Roche)
- Amplificação de RNA teste EMTD (Gen-Probe)
- Amplificação por PCR para linhagem específica
Sensibilidade e especificidade da PCR varia 
entre a população analisada
Biologia molecular aplicada a microbiologia
Meningites bacterianas
- PCR multiplex seguido de dot-blot com sonda 
específica
- Amplificação de rDNA
Ainda não aprovado pelo FDA
Biologia molecular aplicada a microbiologia
Helicobacter pylori
- RT-PCR avaliação da expressão gênica
- PCR para o gen decodificador da urease
PCR especificidade 100%
sensibilidade 96%
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	Diagnóstico laboratorial
	Detecção direta
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	Diagnóstico molecular
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	Diagnóstico laboratorial molecular
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	Biologia molecular aplicada a microbiologia
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	Teste Amplicor ou AMTD
	Teste Amplicor ou AMTD
	Teste EMTD ou Gen-Probe
	AMPLICOR X EMTD
	Biologia molecular aplicada a microbiologia
	Biologia molecular aplicada a microbiologia
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