determinação de açucar

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Introdução 
Determinação de açucares totais - Método de Antrona - YEMM & WILLIS (1954)
Para se estimar o teor de açúcares redutores e açúcares redutores totais em alimentos, existem vários métodos químicos não seletivos que fornecem resultados, com elevado grau de confiabilidade, quando utilizados corretamente após eliminação de interferentes. AST(açúcar solúveis totais) representam a reserva de energia prontamente disponível para o crescimento dos tecidos. São representados pelos açúcares redutores (glicose e frutose) e não-redutores (sacarose). O método que utilizamos é o da Antrona que é realizado em meio fortemente ácido, onde há hidrólise dos dissacarídeos e formação de furfural, os quais reagem com a antrona formando um produto de coloração azul esmeralda, que é quantificado colorimetricamente. O Reagente de Antrona (PA) Ácido Sulfúrico Concentrado (H2SO4, PA) Merck, Riedel, Sigma, Fluka (de boa qualidade).
Material e metodologia:
VIDRARIA:							EQUIPAMENTOS:
Beckers de 250 mL						- Banho Maria fervente
Bastão de vidro						- Banho de gelo
Funil						- Espectrofotômetro
Pipetas de 10 mL, 1 mL e 0,1 mL			- Balança analítica
Tubos de ensaio						- Centrífuga
Pese cerca de 1g da amostra triturada em cápsula de procelana. 
Transfira para erlenmeyer de 250 mL com auxílio de cerca de 100 mL de álcool etílico a 80% e adicione cerca de 0,5 g de carbonato de cálcio.
Manter em banho-maria a 80 – 85 °C/1 hora sob refluxo com auxílio de funil de gargalo de vidro.
Retirar o erlenmeyer do banho após e deixar repouso por 18 horas (over-night), sob temperatura ambiente.
Transferir para erlenmeyer 500 mL filtrando em filtro de papel, lavando com 2 porções de 20 mL com álcool a 95%.
Colocar o erlenmeyer em chapa aquecedora para evaporar o álcool até cerca de 10 mL.
Adicionar água lavando as bordas do erlenmeyer e transferir para balão volumétrico de 100 mL.
Preparo do Reagente de Antrona: 
Adicione 40 mg de antrona a 1 mL de água destilada, posteriormente, 20 mL de H2SO4 concentrado (Este reagente deve ser preparado na hora do uso e sob resfriamento (banho de gelo). Preparo da solução padrão de Glicose (100μg mL-1 ou 0,555mM) Solução Padrão de Glicose Anidra 10mM (STOCK): Pesa-se 1,8g de glicose anidra em balão volumétrico de 10 mL e adiciona-se água
Extração da SACAROSE:
Pipete 20 mL do extrato e transferir para erlenmeyer de 125 mLAdicione 0,5 mL de HCL PA, ferver por 15 minutos em Banho Maria fervente Resfriar e neutralizar com Solução saturada de Na2CO3.Completar o volume para 50 mL em balão volumétrico com água destilada.
Procedimento:
Tomar 2 tubos de ensaio (A e B), pipetar 0,1 mL; 0,2 mL respectivamente nos tubos A e B. Completar o volume para 1,0 mL com água destilada. Adicionar em cada tubo 2 mL do reativo de Antrona em banho de gelo. Homogeneizar. Aquecer em banho de água fervente por 5 minutos. Resfriar em banho de gelo. Ler os valores de absorbância no espectrofotômetro a 620 nm e anotar as leituras.
Cálculos:
Os valores de absorbância observados nos tubos A e B foram respectivamente: 0,502; 0,495.
Desse modo, foi possível determinar as concentrações de glicose obtidas nos tubos através da equação da reta que é dada por: y= –0,00271 + 0,01806x, aonde y se refere ao valor da absorbância encontrado na leitura do espectrofotômetro e x se refere a concentração de glicose.
Realizando-se os cálculos obteve-se os seguintes resultados: 
Tubo A: 0,502 = – 0,00271 + 0,01806x==> 27,9462 x = μg 
Tubo B: 0,254 = – 0,00271 + 0,01806x==> 14,2142 x = μg 
Com isso pode-se determinar a porcentagem em gramas de AST (açúcar solúveis totais) contidos nos tubos A e B. Para isso obteve-se a quantidade que cada tubo possuía em gramas da amostra, em seguida, realizou-se os cálculos para determinar g%AST. Pelo método do Km se faz o somatório da concentração de glicose dividido pelo somatório das absorbâncias. Em seguida, se encontra o valor em g% da amostra e depois se multiplica o valor da absorbância pela g% encontrada anteriormente para se obter a quantidade em g%AST. 
Km= (∑[ ]) / (∑[abs]) ==> x μg g%AST = Absorbância x g (%)
Tubo A:
0,01g______ 27,9462 μg
100g________ x (%)==>x = 279462,00μg (%)/1000000 ==>2,79462 g (%)
2,79462g(%) x 0,502 ==> 1,4028g%AST
Tubo B:
0,005g______ 14,2142 μg
100g_______ x (%)==> x = μg (%)/1000000 ==>2,84284 g (%)
2,84284g x 0,254 ==> 0,7220 g%AST
CONCLUSÃO:
Com os dados obtidos de absorbância encontrados nos tubos A e B da amostra pelo aparelho espectrofotômetro foi possível determinar a quantidade em gramas % de AST (açúcares solúveis totais) encontrados em cada tubo. É importante ressaltar que cada tubo continha um volume diferente da amostra analisada, de tal modo que a g%AST encontrados em cada um sejam diferentes. Devemos observar que como toda reação de condensação, as condições de aquecimento e resfriamento durante a execução da técnica, devem ser estritamente padronizadas em todos os tubos para uniformidade de resultados. O método tolera uma concentração de etanol ou metanol de até 5% (p/v) procedente da extração de açúcares, porém, esse resíduo deve ser evitado