MÉTODOS DE COLETA DE SÊMEN

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MÉTODOS DE COLETA DE SÊMEN
VAGINA ARTIFICIAL: ruminantes, pequenos ruminantes, equinos e felinos
ELETRO-EJACULAÇÃO: ruminantes, pequenos ruminantes e grandes felinos
EXCITAÇÃO MECÂNICA: caninos e suínos
GARANHÕES
- SÊMEN: ↑VOL e ↓[ ]. Coletar em DIAS ALTERNADOS
- VAGINA ARTIFICIAL: deve ser preparada minutos antes da coleta. A água acrescentada deve estar em torno de 45° C, lubrificada na sua entrada e o frasco coletor previamente aquecido a 37° C em sua porção final com o filtro em sua boca para a separação da parte gelatinosa
- ÉGUA-MANEQUIM: é uma égua em estro ou em ovariectomia e estimulada hormonalmente. O pênis do garanhão deve ser higienizado com algodões umedecidos a 33° C. Ejaculação = “BANDEIRA”
BODES E CARNEIROS
- SÊMEN: ↑VOL e ↓[ ]
- VAGINA-ARTIFICIAL: é o melhor método para ser utilizado porque imita as condições anatômicas do sistema genital feminino, ela deve estar em uma temperatura de 60 °C, mas para isso deve ter o animal TREINADO e ACOSTUMADO com a retirada diária de sêmen. Devem introduzir fêmeas em e deixar que as monte (acostumar com fêmeas presas). Se o macho tiver baixa libido, introduzir um macho ativo para excitação. O coito de pequenos ruminantes é rápido “ESCATO”. 
- ELETRO-EJACULAÇÃO: utilizado quando o macho não é treinado ou quando há um número grande de animais para coleta. DESVANTAGEM: contaminação pela urina. VANTAGEM: ↑↑VOL e ↓[ ]
FELINOS
ELETRO-EJACULAÇÃO: com animal anestesiado
VAGINA ARTIFICIAL: não é usual
TOUROS
SÊMEN: ↓ VOL e ↑ [ ]
VAGINA ARTIFICIAL: aquecida a 45 ° C. Para aumentar a qualidade do sêmen usa-se a técnica de “FRUSTRAÇÃO” que são 3 tentativas de coito com interrompimento no momento de ejaculação. O coito do touro também é rápido “ESCATO”
CÃES
SÊMEN: ejaculação lenta e em 3 FRAÇÕES
1° FRAÇÃO (PRÉ-ESPERMÁTICA): aquoso e claro, de 0,1-3ml
2° FRAÇÃO (ESPERMÁTICA): turvo e leitoso, de 0.5-5ml
3° FRAÇÃO (PÓS-ESPERMÁTICA): claro, de 3-30ml
EXCITAÇÃO MECÂNICA PELA MANIPULAÇÃO DO PÊNIS (BASE DO PÊNIS)
Não existe vagina-artificial para cães. O recipiente com água para os espermatozoides deve estar aquecido em 37 ° C
SUÍNOS
SÊMEN: ejaculação lenta e em 3 FRAÇÕES (igual ao cão). ↑↑↑ VOL (>100ml)
EXCITAÇÃO MECÂNICA PELA MANIPULAÇÃO DA GLANDE “MÃO ENLUVADA”, são movimentos de ordenha na glande do suíno, o sêmen irá escorrer pela luva até o recipiente
MÉTODOS AUXILIARES (COLETA DE SÊMEN DO EPIDÍDIMO)
Animais mortos e subférteis
Técnica > envio > congelação
AVALIAÇÃO DO SÊMEN- ANÁLISE MACROSCÓPICA:
	 COLORAÇÃO
	 ASPECTO
	CORES NORMAIS:
BRANCA: cão, cachaço, garanhão, jumento e touro
AMARELADO: bodes e touros
PÉROLA/MARFIM: carneiros
NÃO NORMAIS:
VERMELHO: sangue
AMARELADA: urina ou pus 
	SEROSO: 
↑ plasma seminal
Cão, suíno e equino
LEITOSO:
Equino
CREMOSO:
↑ [ ]: ↑ espermatozoides em ↓ Vol
PRECISA DILUIR
Ruminantes e pequenos ruminantes 
	 VOLUME
	 ODOR
	Ml (varia de acordo com a espécie) 
	Sem odor específico
	 pH
	 MOVIMENTO DE MASSA
	pH normal = 7
Medir o pH em FITAS PARA MEDIÇÃO: pingar 4 gotas em cada quadrado da fita e comparar o pH
	É a observação se há movimentação da massa coletada. Deve ser olhada contra a luz (possui diferenças de tonalidades)
MOVIMENTAÇÃO: PRESENTE ou AUSENTE
APENAS EM RUMINANTES
ANÁLISE MICROSCÓPICA:
	CONCENTRAÇÃO
	MOTILIDADE
	Concentração espermática
	Taxa de espermatozoides em movimento
0 – 100%
	MOVIMENTO RETILÍNEO PROGRESSIVO (MRP)
	VIGOR
	Taxa de espermatozoides que caminham em movimento progressivo 
0 – 100%
	Intensidade do movimento a partir do BATIMENTO DO FLAGELO
0 – 5%
	TURBILHONAMENTO
	PATOLOGIAS
	É a observação de massa em sua forma microscópica. Observa-se os espermatozoides que estão fazendo movimentos de “ONDAS”
Usar a lâmina aquecida a 27 °C, com sêmen em sua forma pura e com a lente de 4x e sem lamínula
APENAS EM RUMINANTES
	De cabeça
De cauda
PREPARAÇÃO DA LÂMINA:
1 MOTILIDADE, MRP, VIGOR E TURBILHONAMENTO
- Deixar o sêmen coletado em banho-maria a 37 °C. A lâmina, a lamínula e a ponteira da pipeta devem estar também aquecidas a 37 °C (para que não ocorra choque-térmico nos espermatozoides). O Sêmen deve ser diluído em água salina, também a 37 °C
- Com a pipeta, retirar um pouco do sêmen
- Colocar o sêmen na lâmina e cobri-la com a lamínula
- No microscópico, colocar a placa de platina. A lâmina já pronta fica em cima da placa de platina. Deve se certificar que a luz do microscópio esteja batendo na gota de sêmen da lâmina
- A observação começa no aumento de 4x com a bandeja do microscópio descida. Focar a imagem. 
- AUMENTO DE 4x: enxergar o TURBILHONAMENTO (sem a utilização da lamínula)
2 CONCENTRAÇÃO ESPERMÁTICA
- Não precisa ter nenhum material aquecido (os espermatozoides precisam estar parados). 
- O sêmen deve ser diluído em água em temperatura ambiente, para isso, deve diluir 1 parte de sêmen para 20 ml de água, pois a diluição é sempre 1:1000
- A água para diluição será feita com a pipeta maior de 10 ml, você pegará 2x (dando 20ml) e colocará esses 20 ml em um bécher para assim fazer a diluição
- Com a pipeta normal, deve colocar em 20 u e retirar e retirar um pouco da água do bécher de diluição. Agora no bécher de diluição terá 999 partes de água e 1 parte de sêmen. Ideal para diluição
- O único material que deve estar aquecido é a ponteira da pipeta, usada para pegar a amostra de sêmen e assim diluir no bécher. Após pegar 20 unidades de sêmen, a ponteira da pipeta deve ser limpa com um papel toalha (não encostar a ponta da ponteira da pipeta no papel, apenas as bordas)
- Diluir a amostra de sêmen no bécher já pronto. Misturar com a própria pipeta o sêmen com a água até haver a homogeneização
- Pegar a Câmara de Neubauer, passar um pouco de saliva na lamínula e assim “grudar” a lamínula na câmara de Neubauer 
- Com o sêmen já diluída, pegar 20 unidades do sêmen diluído e colocar nos cantos da câmara de Neubauer (nos dois cantos)
- Colocar a câmara de Neubauer no microscópio, começar com a lente de 4x até chegar de 40
CONTAGEM ESPERMÁTICA: deve escolher um quadrando, e partir dele, fazer um L normal e um L invertido. A contagem é feita a partir da cabeça dos espermatozoides e se eles estão ou não tocando as linhas imaginárias dos L’s. A cabeça dos espermatozoides nunca estar tocando a linha imaginária ou estar para fora dessa linha. A contagem dos espermatozoides deve ser feita nos 2 compartimentos da câmara de Neubauer (a diferença aceita entre os compartimentos deve ser de até 10%). Caso haja disparidade, fazer nova amostra
Após a contagem dos dois compartimentos, aplicar na fórmula
3 PATOLOGIAS
% DEFICIENTE > 9: problemas relacionados à cabeça do espermatozoide (acrossomos), acabam comprometendo a fertilização
% DEFICIENTE < 2: problemas relacionados à cauda do espermatozoide (são defeitos compensatórios)
ESFREGAÇO + COLORAÇÃO DE PANÓTIPO (DEFEITOS DE CABEÇA): Pegar uma lâmina pré-aquecida a 37 ° C, colocar o sêmen em alguma das pontas da lâmina (diluir o sêmen para pequenos ruminantes), pegar outra lâmina, também pré-aquecida e assim fazer o esfregaço do sêmen nas lâminas. Após o esfregaço, coloração das lâminas. 20 segundos em cada recipiente, secando a lâmina depois de mergulhada. Feito a coloração, enxaguar em água corrente e esperar secar
CÂMARA ÚMIDA (DEFEITOS DE CAUDA): Diluir o sêmen (sêmen pré-diluído em pequenos ruminantes) em 2ml de FORMOL SALINA a 37 °C. Após a diluição, pingar uma pequena gota do sêmen diluído no centro da lâmina
LAMÍNULA: colocar a lamínula em cima da gota de sêmen
ESMALTE: pintar em formato de quadrado (do tamanho da lamínula) em volta da gota do sêmen. O esmalte serve para que haja o selamento, criando a câmara úmida
Esperar 24h para a fixação dos espermatozoides no formol
4 CONGELAÇÃO DE SÊMENQUANT. TOTAL DE ESPTZ = [ ] x Vol
QUANTIDADE TOTAL DE ESPERMATOZOIDES:
QUANT. DE ESPTZ VIÁVEIS = QUANT. TOTALDE ESPERMATOZOIDES x MPR
QUANTIDADE DE ESPERMATOZOIDES VIÁVEIS:
QUANTIDADE DE ESPERMATOZOIDES VIÁVEIS POR DESCONGELAMENTO:QUANT. DE ESPTZ VIÁVEIS O DESCONGELAMENTO = QUANT. DE ESPTZ x 0,5
QUANTIDADE DE DOSE INSEMINANTES:
VOLUME TOTAL DA PALHETA:VOL. TOTAL DE PALHETAS = QUANT. DE DOSES INSEMINANTES x VOL. DA PALHETA
VOL. DO DILUIDOR = VOL. TOTAL DA PALHETA – VOL. DO SÊMEN 
VOLUME DO DILUIDOR: