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UNIVERSIDADE FEDERAL DA GRANDE DOURADOS FACULDADE DE ENGENHARIA ENGENHARIA DE ALIMENTOS MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS ISOLAMENTO DE MICRORGANISMOS E TESTES BIOQUÍMICOS DE CITRATO, CATALASE, VM E VP CLARA SANTA ROSA FIORITI GEOVANE AMARAL DA CUNHA GUILHERME LEONEL MACHADO LUCAS HENRIQUE FARAONI NAIARA APARECIDA DE SOUSA Profª Dr. Cristina Tostes Filgueiras DOURADOS/MS 2019 1. INTRODUÇÃO A técnica de isolamento de colônias de um determinado microrganismo a partir de uma cultura mista tem como objetivo obter uma colônia separada onde será possível caracterizar a bactéria sem que haja interferência de outras espécies de microrganismos, tornando-as viáveis para cultivo no laboratório. Para isso, é necessário apropriar-se de técnicas de estrias ou espalhamento em meio de cultura específico. Essas estrias podem ser feitas do modo simples, onde a alça de inoculação ou platina percorre a placa em “ziz-zag” ou a alça pode ser esgotada de forma em que as estrias fiquem paralelas no canto da placa e são continuadas no mesmo modo nas extremidades. Normalmente após o isolamento uma colônia é retirada e inoculada em meios de culturas específico em tubos inclinados (SILVA, 2010). Cada microrganismo possui um metabolismo distinto, uns podem fermentar glicose, outros podem degradar determinados compostos. Essas características bioquímicas são determinadas por diversos testes. A análise de Voges-Proskauer(VP)é um teste bioquímico capaz de determinar se uma espécie de microrganismo libera a acetoína ao metabolizarem a glicose. Já a análise de Vermelho-de-Metila (VM) determina se uma bactéria fermenta a glicose formando ácidos. Ambas análises necessitam de reagentes de leitura, onde a mudança de cor determina a obtenção do teste positivo (SILVA, 2010). O teste do citrato e catalase também são testes bioquímicos para a caracterização de um microrganismo. O teste do citrato tem como objetivo analisar se o microrganismo estudado usa o citrato como única fonte de carbono, alterando o pH. O ágar citrato de Simmons + o indicador de pH azul de bromotinal tem cor verde quando pH é neutro. Quando o pH fica básico o ágar muda para a cor azul caracterizando teste positivo. O teste da catalase tem por objetivo analisar se a bactéria degrada peróxido (SILVA, 2010). Diante do exposto, o objetivo desse trabalho foi isolar uma colônia de cultura mista de leite cru e após a isolação realizar testes bioquímicos para caracterizar o microrganismo da colônia. 2. MATERIAL E MÉTODOS As análises foram realizadas no Laboratório de Microbiologia (LAMICRO) da Universidade Federal da Grande Dourados. A técnica de isolamento de colônia foi realizada no fluxo de luz UV com auxílio da chama do bico de Bunsen. As placas de cultura mista de leite cru em diluição 10-3teve uma colônia retirada com alça de platina e estriada em placas com ágar PCA. Foram feitas estrias simples e comportas. As placas foram incubadas à 35ºC por 48 horas. Após a incubação foram feitos testes de citrato, catalase, VP e VM. Para o teste de citrato foi escolhida a colônia mais isolada e estriada em ágar inclinado de citrato de Simmons e incubadas em estufa à 37ºC por 72 horas. Para o teste de catalase uma colônia isolada foi estriada em lâmina e adicionadas algumas gotas de peróxido de hidrogênio, foi observada a formação de bolhas. O VP e o VM foram feitos com caldos glicosados e, com a alça de platina, a colônia foi inoculada e incubadas à 37ºC por 48 horas. Após a incubação foram adicionados os indicadores a base de potássio para VP e vermelho-de-metila para VM e foram observadas as reações. 3. RESULTADOS E DISCUSSÃO Para as análises realizadas no primeiro dia, foi feito o isolamento de microrganismos, estria simples e compostas, obtendo o resultado observado nas figuras abaixo. Figura 1. Estria simples Figura 2. Estria composta O primeiro teste bioquímico realizado foi o da catalase, com o intuito de analisar a degradação do peróxido de hidrogênio pela enzima catalase, obteve-se então o resultado negativo, indicando que não houve a degradação. Para o segundo teste, citrato de Simmons, no qual foi realizado estria composta, o tubo permaneceu na cor verde,significando um resultado negativo, ou seja, o microrganismo não é capaz de utilizar o citrato como única fonte de carbono. Quando o microrganismo utiliza o citrato como fonte de carbono indica teste positivo, resultando na alcalinidade do meio, tornando-o azul. Figura 3. O tubo verde representa o teste negativo, já o tubo azul representa o teste positivo. No teste Vermelho de Metila (VM) o resultado foi positivo, ocorrendo a fermentação da glicose, deixando o meio ácido, e alterando a cor para rosa avermelhado. O resultado é representado na figura abaixo. Figura 4. Teste positivo para o Vermelho de Metila (VM). O teste Vogues-Proskauer (VP), é realizado com o intuito de analisar a oxidase da acetoína em diacetila, utilizando o hidróxido de potássio como reagente de leitura, podendo ser observado na figura 5. Figura 5. Resultado negativo para VP. Analisando a figura a cima, observa-se o resultado negativo, pois a coloração permaneceu amarela, caso o resultado fosse positivo a coloração mudaria para rósea ou vermelho. 4. CONCLUSÃO Diante deste estudo pode-se observar que os testes bioquímicos são eficazes na determinação dos microorganismos isolados, pois apresenta claras reações em que há liberação de compostos que são resultados de suas reações metabólicas decorrentes no meio ao qual estão dispostos. REFERÊNCIAS SILVA, Neusely da.; JUNQUEIRA, Valéria Christina Amstalden; SILVEIRA, Neliane Ferraz de Arruda; TANIWAKI, Marta Hiromi; SANTOS, Rosana Francisco Siqueira dos; GOMES, Renato Abeilar Romeiro.Manual de métodos de análise Microbiológica de Alimentos e água. 4- Ed. São Paulo: Editora Varela, 2010.
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