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AOP 2 MICROBIOLOGIA – CURSO NUTRIÇÃO LEONARDO PONTES BERTULANI 2º PERIODO. 1ª Questão: Antes de realizarmos a coleta, uma paciente foi orientada a fazer assepsia da região genital e também, dispensar o primeiro jato, coletando apenas o jato intermediário de urina. Feito esse procedimento, a urina foi semeada em meio de cultura não seletivo, estéril e colocada em estufa à 37º C/48 horas. Após esse período a cultura se apresentou mista, com aspecto das colônias típicas de bactérias. A coloração de gram realizada revelou a existência de cocos gram positivos e cocobacilos gram negativos. O técnico de laboratório concluiu, após avaliação, que os gram positivos eram Staphylococcus sp e pertenciam à microbiota normal, enquanto os gram negativos se tratavam de Ureaplasma sp provável gênero relacionado com o quadro infeccioso. Então, ao ler o texto acima, responda: a) Caracterize, detalhadamente, a ultra-estrutura (composição química) da parede celular dos Staphylococcus identificados na cultura acima. R: A ultra-estrutura da parede celular dos Staphylococcus é composta por camadas de peptidioglicano, que corresponde a 90% da parede. Também apresenta ácido teicóico, que responde pela especificidade antigênica da parede, tornando possível a identificação de bactérias em testes laboratoriais. E ácido lipoteicóico, que é polissacarídeo ácido, com resíduo de glicerol fosfato ou ribitol fosfato, confererindo carga negativa à superfície celular, regulando o movimento de íons + (Ca2+ e Mg2+) na célula. b) O Ureaplasma sp é uma bactéria sem parede celular. Por que então ela se mostrou como gram negativa? R: O Ureaplasma sp é uma bactéria sem parede celular. Por que então ela se mostrou como gram negativa? Pois apesar de não possuir parede celular, ela possui membrana plasmática muito semelhante a todas as membranas celulares em composição química e funções associadas. A membrana celular apesar de ter características de revestimento, se difere da parede celular por possuir menor permeabilidade, ou permeabilidade seletiva. Também possui composição lipoproteica formada por bicamada lipídica, dessa forma sendo sensível ao uso de álcool. Ao aplicar o álcool na lavagem das laminas, ele solubiliza as estruturas lipídicas da célula, tornando mais permeável a membrana plasmática das bactérias gram negativas e gram positivas. Dessa forma, os dois tipos tendem e se descorar, entretanto a gram negativa se descora mais. Depois de se lavar com o álcool, lava-se novamente a lamina, agora com água. Após as lavagens é aplicado o contracorante safranina. Conferindo a cor, é possível observar que as gram negativas se descoloram mais. c) O que é uma cultura do tipo mista? R: É uma cultura que contém populações de diferentes tipos de microrganismos presentes. d) Um aluno da disciplina de Microbiologia geral, ao ver a mesma lâmina acima, corada pelo método de Gram, afirmou que os cocos Gram positivos observados, na verdade se tratavam de uma levedura, questionando o laudo anterior. O que pode ser observado nessa lâmina que esclareça essa dúvida, Coco ou levedura? R: Pode ser observado o formato e o tamanho, já que as leveduras possuem um formato mais oval e as bactérias gram positivas possuem formato mais circular e são menores que as leveduras. Outra observação que pode ser feita é a presença ou ausência de pseudo-hifas, que são pertencentes às leveduras. 2ª Questão: BIOLOGIA DA INFECÇÃO DE ZIKA VIRUS EM CÉLULAS HUMANAS O vírus Zika (ZIKV) é um flavivírus (família Flaviviridae) transmitido por Aedes aegypti e que foi originalmente isolado de uma fêmea de macaco Rhesus febril na Floresta Zika (daí o nome do vírus), localizada próximo de Entebe na Uganda, em 20 de abril de 1947. Esse vírus é relacionado ao vírus da febre amarela e dengue, e que causam febre hemorrágica. O vírus Zika tem causado doença febril, acompanhada por discreta ocorrência de outros sintomas gerais, tais como cefaleia, exantema, mal estar, edema e dores articulares, por vezes intensas. No entanto, apesar da aparente benignidade da doença, mais recentemente na Polinésia Francesa e no Brasil, quadros mais severos, incluindo comprometimento do sistema nervoso central (síndrome de Guillain-Barré, mielite transversa e meningite), associados ao Zika têm sido comumente registrados. Estruturalmente, este vírus apresenta genoma de RNA, fita simples e polaridade positiva. É envelopado e com capsídeo de simetria poliédrica. Haddow AD, Schuh AJ, Yasuda CY, Kasper MR, Heang V, et al. (2012) Genetic Characterization of Zika Virus Strains: Biology of Zika virus infection in human skin cells. J Virol 89:8880 –8896. Então, ao ler o texto acima, responda: a) O ZIKV, assim como descrito acima, é um vírus de RNA de polaridade positiva. O que isso significa? R: Um vírus RNA é dito de "polaridade positiva" quando seu genoma tem a mesma polaridade ou orientação do mRNA. Em outras palavras, seu genoma pode servir como mRNA e portanto, iniciar a síntese de proteínas. b) “Um vírus de capsídeo desnudo ou mesmo envelopado, quando perde, respectivamente, estas estruturas, perde também sua capacidade infectiva.” TRABULSI, 2010. Caracterize quimicamente o capsídeo e envelope viral e cite a etapa do processo de replicação viral dependente da presença destas estruturas. Um vírus de capsídeo desnudo ou mesmo envelopado, quando perde, respectivamente, estas estruturas, perde também sua capacidade infectiva.” TRABULSI, 2010. Caracterize quimicamente o capsídeo e envelope viral e cite a etapa do processo de replicação viral dependente da presença destas estruturas. O capsídeo é um revestimento de origem proteica e o envelope viral fica localizado externamente ao capsídeo e é formado por lipídios, proteínas e carboidratos. Essa estrutura deriva do sistema de membranas da célula parasitada e é adquirida no momento em que o vírus é eliminado pelo processo de brotamento. A etapa dependente dessas estruturas é a adsorção, onde ocorre a interação entre a célula que será parasitada e os vírus, formando ligações entre os seres invasores e os receptores na membrana da célula.
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