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Diagnóstico Laboratorial das Hepatites Virais Profª Juliana Menara de Souza Marques Hepatite = distúrbio inflamatório do fígado Viral Trans-infecciosa (inf. Sistêmica) Por vírus hepatotrópicos CMV Epstei n-Baar Febre Amarela Herpes simple s Outras A, B, C, D, E Hepatites Infecciosas Bactérias Fungos Protozoários Diagnóstico laboratorial Se baseia em 3 pontos: •Testes bioquímicos •Testes sorológicos •Testes de biologia molecular Testes bioquímicos •Determinação dos níveis séricos de atividade enzimáticas: •Aminotransferases • Fosfatase alcalina •Gama-glutamiltransferase •Concentração sérica das bilirrubinas ALT e AST • Aspartato-aminotranseferase (AST) e alanina aminotransferasse (ALT) • Enzimas do citoplasma de hepatócitos • ALT: mais específica do fígado • AST: mitocondrial • Aumento de 10 a 100 vezes • 10 dias antes de surgirem os sintomas • Pico em uma semana após o surgimento dos sintomas • Indicam comprometimento hepático - Acompanhamento do curso da infecção. ALT e AST Casos benignos: • Os níveis séricos de atividade enzimática retornam ao normal dentro de poucas semanas. • ALT> AST Casos crônicos • Persistência do aumento enzimático por período superior a seis meses. • AST >ALT- Comprometimento mitocondrial e necrose • Casos fulminantes: ↓ brusca – Destruição do parênquima hepático FAL e ƴ-GT • Indicam colestase • Hepatites virais: aumento discreto • Índice ALT/ ƴ-GT: • Hepatite viral: >2 • Icterícia obstrutiva: <1 • ↑ ƴ-GT: • Ação do álcool e drogas • Obstrução dos ductos biliares • Tumores hepáticos • Hepatopatias alcoólicas Bilirrubinas • Elevam-se após o aumento das aminotransferases; • Nas formas agudas, podem alcançar valores 20 a 25 vezes acima do normal; • Apesar de haver aumento tanto da fração não- conjugada (indireta) quanto da conjugada (direta), esta última apresenta-se predominante. • Na urina pode ser detectada precocemente, antes mesmo do surgimento da icterícia. Seqüência de Marcadores Sorológicos na Hepatite A Marcadores Imunológicos Hepatite B HBsAg • Antígeno de superfície do HBV • É o marco da infecção pelo HBV • Detectado a partir de 1 a 10 semanas após exposição • Eliminado dentro de 4 a 6 meses pelos pacientes que se recuperam • Persistência > 6 meses – hepatite crônica • Títulos não tem significado clínico Anti-HBs • É o anticorpo contra o antígeno de superfície • É um anticorpo neutralizante que oferece imunidade protetora contra o HBV • Detectado de 1 a 10 semanas após o desaparecimento do HBsAg. • Marcador de cura da hepatite B, juntamente como desaparecimento do HBsAg • A co-existência de ambos é rara (forma crônica, com anti-HBs não neutralizante) • Encontrado isoladamente - vacinação Marcadores Imunológicos Hepatite B Anti-HBc IgM • Primeiro anticorpo a ser identificado após a infecção por HBV (1 mês após o HBsAg) • Presente em altas titulações na fase aguda da infecção. • Marcador de infecção aguda ou recente • Diminui na fase de recuperação ou nos casos que evoluem para infecção crônica • Pode aumentar nas fases de exacerbação da hepatite crônica Marcadores Imunológicos Hepatite B Anti-HBc IgG • Aumenta na fase de recuperação, à medida em que diminuem as titulações de Anti-HBc IgM • O Anti-HBc é o único anticorpo detectável durante o período de “janela imunológica”. • Este anticorpo não confere imunidade Marcadores Imunológicos Hepatite B HBeAg • Indicativo de replicação viral e infectividade. • Surge na hepatite aguda logo após o HBsAg. • Presença associada à detecção do HBV-DNA e HBsAg. • Permanece positivo certa de 3 a 6 semanas, período em que há alto risco de transmissão. • É rapidamente eliminado na fase aguda, antes do desaparecimento do HBsAg. • Sua persistência por mais de 6 meses indica tendência à cronicidade. Marcadores Imunológicos Hepatite B Anti-HBe • Anticorpo contra o antígeno “e” do HBV • Indica a interrupção da replicação viral • Ocorre conversão do HBeAg para anti-Hbe • Nos casos agudos indica alta probabilidade de cura ; • Nos casos crônicos indica ausência de replicação do vírus (menor atividade da doença) – prognóstico de menor possibilidade de desenvolvimento de cirrose. • Associa-se ao desaparecimento do HBV-DNA Marcadores Imunológicos Hepatite B Curso sorológico da hepatite B aguda Curso sorológico da hepatite B aguda Interpretação dos Marcadores Sorológicos da Hepatite B aguda HCV - DIAGNÓSTICO - Anticorpos anti-HCV (ELISA) - ELISAs: peptídeos sintéticos (p21 e p23) - detecção do genoma por PCR Cultivo in vitro: não é usado Perfil sorológico típico da hepatite C Hepatite Delta (D) • Vírus de RNA incompleto • Depende da infecção prévia pelo HBV para produção de antígeno de superfície. • Na presença do HBV, o vírus delta utiliza o HBsAg e consegue replicar • Replicação enquanto durar a infecção pelo HBV Hepatite D Formas de associação HBV e HDV: • Coinfecção: Infecção ao mesmo tempo HBV e HDV (Transfusão sanguínea); • Doença severa aguda. • Baixo risco de infecção crônica • Superinfecção: Portador crônico do HBV pode infecta- se pelo HDV usualmente desenvolvem HD crônica. Alto risco de doença crônica severa. pode se apresentar como hepatite aguda FORMAS HBsAg Anti-HBc total Anti-HBc IgM Anti-HD total Anti-HBs Coinfecção (+) (+) (+) (+) (-) Superinfecção (+) (+) (-) (+) (-) Cura (-) (+) (-) (+) (+) Diagnóstico laboratorial Incubação: Média 40 dias (15-60 dias) Taxa de mortalidade: Geral 1%-3% Gestantes 15%-25% Gravidade da doença: Aumenta com idade Sequelas crônicas : Nenhuma Hepatite E - Clínica Diagnóstico laboratorial • Anti-HEV IgM (marcador de infecção aguda)- Torna- se positivo no início do quadro clínico desaparecendo após três meses • Anti-HEV IgG (marcador de infecção passada) – Esta presente na fase de covalescencia e persiste indefinidamente. Anti-HEV total Anti-HEV IgM Interpretação (+) (+) Infecção recente (+) (-) Exposição prévia (-) (-) Susceptível Diagnóstico laboratorial Curso sorológico típico da hepatite E Caso clínico • Homem, 45 anos, previamente hígido. Exames de rotina com alteração de transaminases (AST= 85; ALT = 103). Exame repetido e confirmado. Sem hx de uso de medicação ou mudança na sua rotina • Exames: • anti Hbc total: Reagente • anti HbsAg: Reagente • HbsAg: Não reagente • anti HCV: Reagente • anti HIV: Não reagente • a) Encaminho à referência com diagnóstico de Hepatite B • b) Encaminho à referência com diagnóstico de Hepatite C • c) Encaminho à referência com diagnóstico de coinfecção Hepatite B/C • d) Hepatite B antiga, curada. São necessários outros exames para avaliar Hepatite C crônica Caso clínico • Neste caso, para confirmação do diagnóstico deve ser solicitado PCR (HCV-RNA) qualitativo para hepatite C, cujo resultado foi positivo. Caso clínico