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1-Identificação Curso: Farmácia Disciplina: Bioquímica Metabólica Relatório: n° : 3 Título da aula prática: Dosagem de Triacilglicerol NOME RA Débora Patrícia Alves Caixeta C-52959-1 Hárina Cristina da Silva C-5110G-1 Hwskaia Naiara Xavier da Silva C-642HI-0 Ilsa Dias Diniz C-67CGI-2 Professora: Arisneidi Kasue Ikeda Rêde 2-Introdução Na aula prática de bioquímica, aprendemos a manusear equipamentos e vidrarias no laboratório que nos permitiu compreender melhor sobre a dosagem de triacilglicerois em um suposto paciente em jejum (12-14 horas). Os glicerídeos são ésteres de ácidos graxos e glicerol e de acordo com o numero de funções esterificadas do propanotriol, são diferenciadas em mono, di e triglicerídeos plasmáticos existem sob a forma de triglicerídeos que são tri-esteres e ácidos graxos e um álcool linear, opropanotriol, conhecido também como glicerol ou glicerina, cujo grau de saturação depende fundamentalmente da qualidade da gordura ingerida. ¹ Os triglicerídeos existentes no plasma são sintetizados no fígado e pelas células intestinais no período pós-prandial, ou seja, logo após a absorção. A célula absortiva intestinal resintetiza os triacilgliceróis, a partir de seus constituintes fundamentais que foram absorvidas por ela. Cerca de 40% dessa gordura e carregadas pelo sistema porta, sob a forma de quilomícrons e os 60% restantes são lançados no sistema linfático que posteriormente passara para a corrente sanguínea na forma de triglicerídeos contidos nos quilomícrons: podendo seguir três caminhos; podem depositar-se nas células adiposas, chegam aos tecidos musculares, onde são degradadas para o aproveitamento da energia, dirigem-se para o fígado onde irão se unir aos quilomícrons que são transportados no plasma,combinados com proteínas(principalmente as apoliproteínas)formando dessa maneira,complexos lipoproteicos).Logo após a absorção, os triglicerídeos vão aumentando os níveis plasmáticos ao mesmo tempo em que vai produzindo uma lactescência (aspecto turvo e leitoso) no soro, fenômeno conhecido como lipemiapos-prandial ou absortiva.¹ Neste relatório falaremos mais detalhadamente como se faz a dosagem de triacilgliceróis, quais métodos e aparelhos se usam e como acontece cada reação do procedimento. Abordaremos também as taxas de triacilgliceróis normais e se o nosso suposto paciente se enquadra ou não dentro dos padrões normais para a taxa de triacilglicerol. 3-Parte experimental (ou materiais e métodos) Os materiais e equipamentos utilizados para a aula prática foram: Materiais e Equipamentos Quantidade Micropipeta 1 Ponteiras 2 Tubos de ensaios 3 Espectrofotômetro 1 Banho Maria 1 Cubeta 1 Piceta 1 Estante para Tubos de ensaios 1 Pêra de borracha 1 Pipeta de vidro 1 Soluções e reagentes: Amostra (soro sem hemólise, pela presença de substancias cromógena nos eritrócitos. Plasma heparinizado ou colhido com EDTA. Reagente 01: Contem tampão 50 mmol/L, 6,9; acetato de magnésio 4 mmol/L; 4 clorofenol 5 mmol/L; 4-aminoantipirina 300µmol/L ATP 1,0 mmol/L; lípase da lipoproteína ≥ 1400 U/L; glicerolquinase ≥ 1000 U/L e azida sódica 7 mmol/L. Solução padrão 200 mg/dL. Procedimentos utilizados: Pegar 3 tubos de ensaio e identificá-los com letras “ B ” , “ T ” e “ P ”, Utilizando pipeta de vidro e pêra de borracha, adicionar nos tubos B, T e P 2,0mL de reagente de cor. Adicionar no tubo “T”20 µLde amostra, no tubo “P”2,0 µL de solução padrão 200mg /dL, utilizando micropipetas e ponteiras distintas para cada solução. Homogeneizar as duas soluções. Levar os três tubos em estante ao banho maria 37 ° C por 10 minutos. Colocar a solução branca em cubeta e ajustar o espectrofotômetro no zero a 505nm. Passar a solução dos tubos “P” para cubeta e medir a absorbância no espectrofotômetro; Repetir o procedimento “7” com a solução do tubo “T” Com os resultados de absorbância, calcular o valor das triglicérides em (mg/dL). 4-Resultados e Discussões O triacilglicerol é um lipídio cuja molécula é hidrofóbica. A maioria dos lipídios é derivada ou possuem na sua estrutura,ácidos graxos, que são ácidos orgânicos, a maioria de cadeia longa, com mais de 12 carbonos e esta cadeia pode ser saturada ou insaturada. Os triacilgliceróis são lipídios formados pela ligação de 3 moléculas de ácidos graxos com o glicerol, um tri álcool de 3 carbonos, através de ligações do tipo éster. A principal função dos triacilgliceróis é a de reserva de energia, e são armazenados nas células do tecido adiposo, porém, além disso, participam da produção de hormônios e vitaminas. A quantidade normal no organismo varia de 80-149 mg/dl. Em excesso, participa do processo de aterosclerose, que obstrui os vasos sanguíneos. Em nossa análise, obtivemos o resultado que o nosso suposto paciente estava com a taxa de triacilglicerol de 0,306mg/dL. Para chegar nesse resultado reagimos a nossa amostra de soro sem hemólise, pela presença de substancias cromógena nos eritrócitos,plasma heparinizado ou colhido com EDTA,com reagente de cor e com este mesmo reagente de cor reagimos também à solução padrão que contém 200mg de triacilglicerol por dL. Para ocorrerem de forma mais rápida as reações são levadas a banho Maria a 37 °C por 10min. Ocorrendo da seguinte forma: TGC Ácido Graxo + Glicerol Glicerol + ATP Glicerol-3-P + ADP Glicerol-3-P + 02 Dihidroxicetona + H202 H202 + fenol + 4AAP Produto corado A segunda parte da dosagem da triacilglicerol é a espectrofotometria de absorção. Ao zerar o espectrofotômetro com a solução branca, faremos que a absorção do reagente de cor não seja medida nas soluções “Padrão” e “Teste”. No espectrofotômetro mediu-se 0,306 de absorbância no “Teste” e 0,400 no “Padrão”. Com esses valores calculou-se: Triacilglicerol (mg/dL) = Abs. Teste x 200 Abs. Padrão Triacilglicerol (mg/dL) = 0,306 x 200 = 153 mg/dL 0,400 Considerando os valores referência de > 150 mg/dL para um paciente adulto, nosso suposto paciente apresentaria um leve aumento de triglicérides. 5-Conclusão 6-Referências Bibliográficas MARTINS, Prof.J.Mário . Os Triglicerídeos na Prática Médica. Maceió, janeiro de 2012. Acesso em: 24 de setembro de 2016. ¹
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