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UNIVERSIDADE FEDERAL DO TOCANTINS CAMPUS UNIVERSITÁRIO DE GURUPI-TO ENGENHARIA DE BIOPROCESSOS E BIOTECNOLOGIA BIOTECNOLOGIA APLICADA À INDÚSTRIA DE ALIMENTOS E BEBIDAS PROFESSOR: DRA. LEANDRA CRISTINA RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA Nº 1 Produção de Chucrute Gabriel Silva Soares GURUPI/TO 2021 SUMÁRIO INTRODUÇÃO ................................................................................................................ 3 OBJETIVO ....................................................................................................................... 3 Objetivo geral ............................................................................................................... 3 Objetivo específico ....................................................................................................... 3 MATERIAL E MÉTODOS .............................................................................................. 3 Material ......................................................................................................................... 3 Preparação do Chucrute ................................................................................................ 5 Mensuração do potencial hidrogeniônico (pH) ............................................................ 5 Análise sensorial do chucrute ....................................................................................... 5 Análise de acidez titulável das bebidas fermentadas .................................................... 5 Caracterização morfológica e contagem em placas ...................................................... 6 RESULTADOS E DISCUSSÕES .................................................................................... 6 Análise sensorial do chucrute ....................................................................................... 6 Mensuração do potencial hidrogeniônico (pH) do chucrute ........................................ 7 Caracterização morfológica e contagem em placas ...................................................... 8 CONCLUSÃO .................................................................................................................. 9 REFERÊNCIA ............................................................................................................... 10 3 INTRODUÇÃO A fermentação é um dos métodos mais comumente usados proteja os vegetais e mude ativamente suas propriedades sensoriais e nutrição (Nguyen et al., 2013). O chucrute é um alimento produzido a partir da fermentação láctica, o mesmo é um método de conservação de hortaliças que produz poucas alterações de seu valor nutritivo. Devido a seu alto teor de vitamina C (Viana et al.). O chucrute é o produto da fermentação do repolho (Braceia oleácea) por bactérias lácticas do grupo Leuconostoc, naturalmente presentes nas folhas. O processo ocorre a temperatura ambiente e em presença de baixa quantidade de sal (salga seca) e facilitado por um peso que pressione e solte o suco do repolho para facilitar a fermentação. Muito conhecido devido sua grande quantidade de nutriente preservado e o alto teor de vitamina C e bactérias probióticas, que produzem o ácido lático, que lhe dá o sabor característico de alimentos fermentados (MULLER et al., 2018), a produção do chucrute é fácil e de baixo custo, esse relatório teve como objetivo a produção artesanal de modo a observar o nível de ácido lático o nível de pH que podem ser observados pelos nossos sentidos. OBJETIVO Objetivo geral Produção artesanal de chucrute, caracterizando-o de acordo com potencial hidrogeniônico (pH), acidez titulável e contagem padrão em placas. Objetivo específico Desenvolver chucrute fermentado artesanalmente; Analisar a variação do potencial hidrogeniônico (Ph) do chucrute; Analisar a variação da acidez titulável (%ácido lático) produzido pelo chucrute; Verificar a morfologia característica das colônias isoladas do caldo do chucrute. MATERIAL E MÉTODOS Material 4 Material Soluções Equipamento e vidrarias 1 repolho verde in natura grande Solução de hipoclorito de sódio 1% 2 Béqueres de 50 mL para pesagem do sal e do iogurte 1 Iogurte natural Água sanitária (hipoclorito de sódio) 2 Béqueres de 100 mL para análise 1 Bandeja Solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1 N 2 Béqueres de 250mL com álcool para o espalhamento 1 Tábua de corte Solução de fenolftaleína a 1% 1 Béquer de 1000mL para o descarte de ponteira 1 Faca Água destilada 1 Proveta de 50 mL 1 Frasco de vidro com tampa (azeitona ou palmito) já esterilizado (ou com fervura ou em autoclave por 30 min/121ºC) 1 Proveta de 1000 mL 2 Frascos plásticos para coleta (estéreis) 4 Tubos de ensaio com tampão e estéreis 2Colheres/espátulas para usar na pesagem 2 Buretas Bucha e detergente 2 Erlenmeyers para a titulação Máscara 2 Placas com meio MRS Touca. Alça de Drigalski Sal de cozinha a gosto 1 Microtubo eppendorf Caixa de ponteira de 1000 µL e 100 µL Balança analítica 5 Preparação do Chucrute Ao iniciar a preparação do chucrute, primeiro foi feito a desinfecção e a esterilização dos materiais utilizados além do próprio repolho, onde foi colocado em solução de hipoclorito de sódio 1%(v/v) por 15min e enxaguando com água corrente de forma abundante para retirar todo resquício da solução. Logo após o enxague retirou-se 3 folhas inteiras do repolho e a reservou, o repolho foi cortado em pequenas fatias finas e retirado o talo, pesou-se o repolho que deu cerca de 691g e acrescentou o fermentado lático foi acrescentado uma colher e meio de chá e o sal de cozinha (2% do peso do repolho = 14g). O repolho fatiado foi amassado para retirar o máximo de água presente e fazer a mistura do sal e o fermentado lático para em seguida acionar o mesmo é um frasco de vidro esterilizado, evitando entrada de ar entre os repolhos. Usou-se as folhas que que foram reservadas para preencher o frasco e completou o frasco com o líquido que foi amassado para retirar a água e tampou sem aperta. O frasco foi mantido em temperatura ambiente longe de contato com a luz. Mensuração do potencial hidrogeniônico (pH) O pH inicial foi dado em 4,85g da amostra que foi coletada e diluída em 50 mL de água destilada em agitação. Foi utilizado um pHmetro devidamente calibrado para se ter este resultado. As análises foram feitas de 7 em 7 dias até completar 21 dias de experimento. Análise sensorial do chucrute A análise sensorial do chucrute foi realizada pelo próprio integrante e seus familiares, em que foram identificados o aroma, sabor, aparência e uma visão geral do chucrute preparado. Análise de acidez titulável das bebidas fermentadas Para a determinação da acidez do chucrute, foi adicionado a um erlenmeyer 5 g da amostra, 50 mL de água destilada e 3 gotas de solução alcoólica de fenolftaleína a 1%. A titulação foi feita com a solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1 N até o ponto de viragem do indicador (coloração rósea pálida persistente por 30 segundos). A acidez foi calculada de acordo com a equação: 6 Onde: V = volume de solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1 N gasto na titulação (mL); fc = fator de correção da solução de hidróxido de sódio 0,1 N (valor entre 0,98 – 1,02, conforme indicação do protocolo do monitor) 0,1 = molaridade de solução de hidróxido de sódio (0,1 N = 0,1 (mol) (L-1)) usado na titulação; 0,09 = fator de conversão da solução de hidróxido de sódio (NaOH) 0,1 N; m = massa da amostra usada na titulação (g). Caracterização morfológica e contagem em placas Para a contagem de colônias e caracterização morfológicas, foi inoculado 100uL da amostra do dia, sendo feita sua diluiçãoseriada, 100, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4. 10-5, 10-6 e 10-7. Um dia após a cada inoculação, as morfologias presentes nas placas foram identificadas, como a forma, tamanho, elevação e margem. A contagem de colônia (UFC) que estava presente nas amostras, foram feitas pela equação: UFC/Ml = ∁ ∗ 1 𝐷 ∗ 1 𝑉 Onde: C = é quantidade de colônia contadas por placas; D = é a diluição para plaqueamento; V = é o volume da amostra utilizado para plaqueamento UFC/mL = é a quantidade de unidades formadoras de colônias presentes em 1 mL da amostra. RESULTADOS E DISCUSSÕES Análise sensorial do chucrute O chucrute é um alimento a base de repolho fermentado que necessita de um certo período de fermentação, no presente trabalho o período de fermentação foi em torno de 21 dias de fermentação em temperatura ambiente em um frasco de vidro. Logo após o 7 período de fermentação ter sido realizado o frasco foi aberto para fazer as analises sensorial, sendo caracterizado alguns aspectos, cor, sabor, textura, aparência e odor, critérios avaliado pelo próprio integrante e sua família, e tiveram como um resultado geral agradável, cor normal como de um repolho refogado, textura como de um repolho refogado e um pouco crocante, com o sabor agradável com alguns pontos de ser forte que é característica do chucrute e um odor forte característico em processos de fermentação, características já esperadas. Mensuração do potencial hidrogeniônico (pH) do chucrute O chucrute apresentou uma diminuição do pH de acordo com as analise semanais de 0, 7, 14 e 21 dias, com o pH inicial de 4,85 e caindo até seu mínimo de 3,54 no último dia de fermentação. Tabela 1. Dados de pH e %Ácido Lático em dias de fermentação Dias pH Titulação (mL) %Ácido Lático 0 4,85 0,6 0,108 7 3,13 7,6 1,368 14 3,07 8,8 1,584 21 3,54 9,6 1,728 De acordo com a Tabela 1, é notável o crescimento da % do ácido lático que é inversa ao pH, onde teve o decaimento durante os dias de fermentação, na produção são liberados ácidos que acidifica o meio a consequência é a diminuição do seu pH, que está ilustrado na Figura 1. 8 Figura 1. Relação entre a produção de ácido lático e a diminuição do pH. Caracterização morfológica e contagem em placas Para realizar a contagem das placas, primeiro vai ser realizado a contagem da quantidade de colônias isoladas e os valores que se obteve serão substituídos na equação que foi obtida, caracterizando as unidades formadoras de colônias UFC/mL. Tabela 2. Dados da relação quantidades de unidades formadoras de colônias das diluições. Diluição Colônias UFC/mL log (UFC/mL) 10-2 1252 1252E+02 6,097604 10-3 240 240E+03 6,380211 10-4 31 31E+04 6,491362 10-5 3 3E+05 6,477121 10-6 - - - 10-7 - - - Os valores obtidos foram demostrados na Tabela 2 e mostrando o crescimento do log UFC estão demostra na Figura 2. 0,108 1,368 1,584 1,728 4,85 3,13 3,07 3,54 0 1 2 3 4 5 6 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,2 1,4 1,6 1,8 2 0 7 14 21 P o te n ci al H id ro ge n iô n ic o ( p H ) A ci d ez (% Á ci d o L át ic o ) Dias de fermentação %Ácido Lático pH 9 Figura 2. Relação do Log (UFC/ml). Nas diluições seriadas. A morfologia das colônias em placas foi realizada de acordo com o crescimento das colônias em placas para demostrar as espécies de bactérias e leveduras presentes no meio, tendo classificação por seu tamanho, forma, elevação e margem. A morfologia foi encontrada nas placas 10-2, 10-3, 10-4 e 10-5, estão representadas na Tabela 3. Tabela 3. Morfologia dos microrganismos do chucrute em placa. Chucr ute Tamanho Forma Elevação Margem 𝟏𝟎−𝟐 Pinpoint, small,moderate, large Puntiforme, circular, irregular Convexa, papilada Inteira, filamentosa 10-3 Pinpoint, small,moderate, large Puntiforme, circular, irregular Convexa, papilada Inteira, filamentosa 10-4 Pinpoint e small Circular Convexa Inteira 10-5 Small Circular Convexa Inteira CONCLUSÃO Conforme foi mostrado no decorrer do trabalho o chucrute é um alimento fermentado a base de repolho, onde o mesmo era desconhecido pelo integrante do trabalho logo foi provando para avaliar o sabor, textura e odor. Todo trabalho foi realizado com ajuda de vídeo aulas gravadas e o roteiro da prática, onde os foi analisado que o pH sofreu diminuição com decorrer das semanas de teste começando com pH inicial de 4,85 e na ultima semana terminando com pH de 3,54 devido a produção do ácido lático no meio. 6,097604 6,380211 6,491362 6,4771212 0 0 0 1 2 3 4 5 6 7 10^-2 10^-3 10^-4 10^-5 10^-6 10^-7 Diluição Seriadas Log(ufc/mL) 10 Portanto, mesmo com todas dificuldades com falta de materiais adequados para produção do chucrute foi possível produzir, com aspectos agradáveis o e valor nutritivo do chucrute. REFERÊNCIA Nguyen, D. T. L.; Van Hoorde, K.; Cnockaert, M.; De Brandt, E.; Aerts, M.; Thanh, L. B.; Vandamme, P. A description of the lactic acid bacteria microbiota associated with the production of traditional fermented vegetables in Vietnam. International Journal of Food Microbiology, v.163, p. 19–27, 2013. Viana Bezerra, j. Et al. CHUCRUTE (SAUERKRAUT) ALIMENTO E CULTURA. V. 1, 2016 p.4213 MULLER, A., N. ROSCH, G. S. CHO, A. K. MEINHARDT, J. KABISH, D. HABERMANN, C. BOHNLEIN, E. BRINKS, R. GREINER, and C. M. A. P. FRANZ.. “Influence of Iodized Table Salt on Fermentation Characteristics and Bacterial Diversity during Sauerkraut Fermentation.” Food Microbiology 76:473–80, 2018
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