Na cromatografia de fase reversa, a separação de substâncias é influenciada principalmente pela interação entre os compostos a serem separados e a fase estacionária, que é apolar, e a fase móvel, que é polar. A polaridade relativa dos compostos e das fases é um fator crucial, pois determina como as substâncias se distribuem entre as duas fases. Analisando as alternativas: a) O tamanho da coluna - Embora possa afetar a eficiência, não é o principal fator de separação. b) A temperatura ambiente - Pode influenciar, mas não é o fator mais determinante. c) A polaridade relativa dos compostos e das fases - Este é o fator mais relevante para a separação na cromatografia de fase reversa. d) O volume de amostra injetado - Pode afetar a resolução, mas não é o principal fator de separação. e) A velocidade de rotação da coluna - Não se aplica à cromatografia de fase reversa, pois não envolve rotação. Portanto, a alternativa correta é: c) A polaridade relativa dos compostos e das fases.