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01/09/2015 1 Fatores que influenciam o crescimento microbiano Prof. Helena T. Diniz Silva helenadiniz76@gmail.com Alimentos de origem animal e vegetal Mecanismos de defesa contra invasão e proliferação de microrganismos. O crescimento dos microrganismos é afetado por condições físicas e químicas do ambiente. Fatores Ambiente Composição Composição gasosa FATORES alimento FATORES INTRÍNSECOS Características do alimento Alimento FATORES EXTRÍNSECOS alimento se encontra FATORES EXTRÍNSECOS Características do ambiente onde o alimento se encontra Aa pH Eh 01/09/2015 2 Fatores intrínsecos Por meio da determinação desses parâmetros, pode-se prever, de um modo geral, quais os microrganismos que tendem a crescer em determinados alimentos e, consequentemente, sua estabilidade. Mede a disponibilidade de água em um alimento Aa ou Aw = pressão de vapor da água contida em um alimento pressão de vapor da água pura (1) Aa = p/po Atividade de água (Aa) Multiplicação de microrganismos: • Aa mínima 0,6 • Aa ótima • Aa máxima ligeiramente < 1 Ordem decrescente de necessidade de Aa alta Bactérias G- > Bactérias G+ > Leveduras > Bolores Atividade de água (Aa) Influenciada pela adição de sal ou açúcar 01/09/2015 3 0,6 é considerado o valor de Aa limitante para a multiplicação de qualquer microrganismo. Atividade de água (Aa) BAIXA UMIDADE (Aa até 0,6) UMIDADE INTERMEDIÁRIA (Aa entre 0,6 e 0,9) ALTA UMIDADE (Aa acima de 0,9) Atividade de água (Aa) Alterações em todasas atividades metabólicas ↓ Aa ↓ Capacidade de crescimento dos microrganismos ↑ Fase lag e o tempo de geração (velocidade de multiplicação) Crescimento cessa (↓ da população final) ↑ Quan�dade de nutrientes e mais próximo da temperatura ótima ↑ Faixa de Aa ↓ Aa pode cessar a produção de enterotoxinas por S. aureus Quando pH, Eh e presença de substâncias antimicrobianas se afastam de condições ótimas para a multiplicação ↑ Aa será necessário 01/09/2015 4 pH Mede a concentração de íons H⁺ no alimento 6,5 < pH < 7,5 (cresce a maioria dos microrganismos) Alguns microrganismos são favorecidos pelo meio ácido Ordem decrescente de tolerância a baixos valores de pH Bolores > Leveduras > Bactérias láticas > Demais bactérias (patogênicas são mais exigentes) A acidez nos alimentos pode ser: • Inerente: referente aos componentes químicos do alimento. Ex. laranja – ácido cítrico. •Biológica: devido a presença de microrganismos que acidificam o alimento. Ex. leites fermentados e iogurtes. pH 01/09/2015 5 pH < 4,5 não ocorre crescimento de Clostridium botulinum pH = 4,0 e o mínimo para o crescimento da maioria das bactérias A carne proveniente de animais fatigados se deteriora mais rápido! Porque? Crescimento de deteriorantes Crescimento de espécies patogênicas e deteriorantes Crescimento bactérias láticas Crescimento predominante de bolores, leveduras e algumas bactérias láticas Crescimento quase restrito a bolores e leveduras 01/09/2015 6 pH Efeito do pH sobre os microrganismos: • Afeta a respiração (age nas enzimas e no transporte de nutrientes); • Aumenta a fase lag da multiplicação; • Desnaturação das proteínas e enzimas da membrana celular; • Alteração do metabolismo da célula; • Maior gasto de energia (tentativa de tornar o pH do meio favorável ao microrganismo); • Retardo no crescimento do microrganismo. Potencial de oxidação-redução (Eh) Facilidade com a qual o substrato ganha (reduz) ou perde (oxida) elétrons. É um índice do grau de oxidação do sistema. Ou adição de oxigênio Com a transferência de elétrons ocorre a criação de um potencial entre os dois compostos. Reduzido – ganha elétrons Oxidado – perde elétrons 01/09/2015 7 Potencial de oxidação-redução (Eh) As características do Eh do alimento original e o acesso que a atmosfera tem com o alimento influenciam o valor de Eh. • Frutas e hortaliças: +300 a +400 mV (fungos e bactérias aeróbias) • Carnes (pedaços grandes): -200 mV (bactérias anaeróbias) • Carne moída: +200 mV • Ovo: +500 mV • Carne de pescado cru: +225 Mv • Leite: +200 mV, +340 mV • Trigo: -320 mV, -360 mV • Queijos: -20 a -200 mV • Fígado: -200 mV Quando aeróbios crescem, a concentração de O₂ no meio diminui, resultando em redução do Eh. Quantidade de nutrientes Para um crescimento ideal nos alimentos os microrganismos precisam de: • Água • Fonte de energia: açúcares (utilizados inicialmente), álcoois e aminoácidos. Alguns utilizam amido e celulose Um grupo reduzido utiliza as gorduras • Fonte de nitrogênio: aminoácidos, nucleotídeos, peptídeos e proteínas complexas. • Vitaminas: complexo B, biotina e ácido pantotênico • Sais minerais: Na, K, Ca, Mg, Fe, Cu, Mn, Zn, Co, P, S. Exigência microbiana quanto aos nutrientes: Quantidade de nutrientes Bactérias Gram-positivas: mais exigentes e necessitam de nutrientes (vit.) do meio; Bactérias Gram-negativas, leveduras e bolores: sintetizam todas ou quase todas as vitaminas que necessitam. Lactobacilos, B. cereus, S. aureus Salmonella, Pseudomonas, Vibrio 01/09/2015 8 Constituintes antimicrobianos naturais •• Inibição da síntese de ácidos nucleicos; • Quebra da integridade da membrana; • Interferências em processos metabólicos essenciais para os microrganismos. Retardam ou microbiana. Retardam ou impedem a multiplicação microbiana. Microbicidas Microbiostáticos Constituintes antimicrobianos naturais Derivados do ácido hidroxicinâmico: • Ação antifúngica e antibacteriana. Derivados do ácido hidroxicinâmico: • Ácidos p-coumárico, ferrúico, caféico e clorogênico; • Encontrados em frutas, hortaliças e chás; • Ação antifúngica e antibacteriana. Enzimas: Leite de vaca • Lactoferrina: retira íons ferro do leite • Lisozima • Nisina: produzida por bactérias láticas • Lactoperoxidase: quebra H₂O ₂ liberando O2 que oxida grupos SH de enzimas metabólicas bacterianas vitais Ovo • Lisozima (clara): destrói parede celular bacteriana, especialmente G+ • Avidina • Conalbumina e outros inibidores enzimáticos • Ovotransferrina: inibe Salmenlla enteretidis Óleos essenciais: Presentes principalmente em condimentos. Apresentam atividade antimicrobiana comprovada Mecanismos de ação antimicrobiana 01/09/2015 9 Estruturas biológicas Cascas: • sementes • frutas • nozes Casca externa e membrana dos ovos Pele dos animais • peixe • gado • porco Fatores extrínsecos Temperatura de armazenamento Fator ambiental mais importante no controle do crescimento microbiano. Maioria dos microrganismos crescem em temperatura ambiente (mesófilos) Registros de crescimento de -34 ºC e 100 ºC 01/09/2015 10 Pseudomonas e Enterococcus (alimentos refrigerados) Quase todos os gêneros bacterianos (maioria dos patógenos de interesse) Bacillus e Clostridium Bacillus e Clostridium Temperatura de armazenamento Bolores: • Crescem em uma ampla faixa de temperatura; • Cladosporium, Aspergillus e Thamnidium podem crescer sob refrigeração. Leveduras: • Crescem em temperaturas psicrotróficas e mesófilas; •Maioria e sensível ao calor. Processo de transporte pouco lento. Crescimento não pode ser percebido. Desnaturação proteica; colapso da membrana citoplasmática; lise térmica. Reações enzimáticas ocorrem a taxas cada vez mais rápidas. Reações enzimáticas ocorrem a taxas máximas. Ef ei to s d a te m p er at u ra s o b re a v el o ci d ad e d e cr es ci m en toe c o n se q u ên ci as m o le cu la re s p ar a a cé lu la 01/09/2015 11 Umidade relativa do ambiente Apresenta estreita relação com a Aa Quando o alimento está em equilíbrio com a atmosfera a UR = Aa x 100 Quanto ↑ a temperatura ↓ será a umidade relativa Umidade relativa do ambiente Fatores importantes na escolha do ambiente de armazenamento dos alimentos: • Verificar se há equilíbrio entre a UR e a Aa do alimento; • Verificar a possibilidade de crescimento de fungos na superfície do alimento; • Preservar, ao máximo, as características organolépticas do alimento. Composição gasosa do ambiente Pode predizer quais os microrganismos que predominam naquele ambiente. • Atmosfera com ↑ O₂ – predominam aeróbios e anaeróbios facultativos. • Atmosfera com ↓ O₂ – predominam anaeróbios estritos e anaeróbios facultativos. • Gases utilizados para modificar a atmosfera: CO₂, O₂, N₂; • Aumentam a vida útil do alimento; • Efeito antimicrobiano do CO₂ e mais intenso em baixas temperatura. 01/09/2015 12 Interações entre microrganismos • Antibióticos • Bacteriocinas • Peróxido de hidrogênio (H₂O₂) • Ácidos orgânicos Interferência microbiana geral: se refere a inibição ou destruição geral e não especifica de um microrganismo por outros do mesmo habitat ou meio. Antagonismo lático: bactérias produtoras de acido lático inibem ou matam bactérias relacionadas e organismos causadores de deterioração ou produtores de toxinas, quando em culturas mistas. Interação entre Bacillus spp. e Botrytis squamosa. Interações entre microrganismos Interferência microbiana: • Competição por nutrientes; • Competição por sítios de adesão; • Alteração desfavorável do ambiente; • Combinações das anteriores. Interações entre microrganismos • Estreptococos e lactobacilos produzem H₂O₂– inibem Pseudomonas, Bacillus e Proteus; • Bactérias láticas produzem acido lático – inibem bactérias pouco tolerantes a pH baixo; • Bolores como Penicillium notatum produzem penicilina; • Diversas espécies de bactérias produzem bacteriocinas: Bacillus, Pseudomonas, Lactobacillus, Pediococcus e etc; • Exclusão competitiva. 01/09/2015 13 Conceito dos obstáculos de Leistner Consiste na combinação de diversos fatores, que são Consiste na combinação de diversos fatores, que são empregados simultaneamente, no controle dos microrganismos em alimentos. Conceito dos obstáculos de Leistner Para crescer os microrganismos precisam transpor uma série de barreiras. Ex. Utilizada na prevenção da germinação de esporos de Clostridium botulinum. Entre os parâmetros utiliza-se: • pH < 4,5; • Aa < 0,96; • NaCl a 10%; • Temperatura < 10 ºC; • Grande biota aeróbia. Referências • JAY, J. M. Microbiologia de alimentos. 6 ed. Porto Alegre: Artmed, 2005. • FRANCO, B. D. G. M.; LANDGRAF, M. F. Microbiologia dos alimentos. 2 ed. São Paulo: Editora Atheneu, 2002. • FORSYTHE, S. J. Microbiologia da segurança dos alimentos. 2 ed. Porto Alegre: Artmed, 2013.
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