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8 Relatório da aula prática – Contagem de bactérias mesófilas: Indicadores higiênicos – técnica de Pour-plate Docente: Marcia Maria Americano Discente: Mabi de Almeida e Liliane P. Lemes Cuiabá - MT 2014 SUMÁRIO 1 INTRODUÇÃO..................................................................................3 2 OBJETIVOS......................................................................................4 3 MATERIAIS E MÉTODOS................................................................5 4 RESULTADOS E DISCUSSÃO........................................................6 5 CONCLUSÃO...................................................................................7 6 REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICAS ...................................................8 1 INTRODUÇÃO Os microrganismo estão presente associados a disponibilidade, a abundancia e a qualidade do alimento para consumo humano. Alimentos são facilmente contaminados com microrganismo na natureza, durante a manipulação e processamento. Após ter sido contaminado, o alimento serve como meio para crescimento de microrganismo. Se esses microrganismo tiverem condições de crescer, podem mudar as característica físicas e químicas do alimento e podem causar sua deterioração. Os microrganismo no alimento podem também ser responsáveis por intoxicação e infecções transmitida por alimentos (PELCZAR JR. et al., 1997). A presença de microrganismo em alimentos não significa necessariamente um risco para o consumidor ou uma qualidade inferior a deste produto. Excetuando-se um número reduzido de produtos submetidos a esterilização comercial, os diferentes alimentos podem conter bolores, leveduras bactérias e outros microrganismo. Muitos alimentos tornam-se potencialmente perigosos ao consumidor somente quando os princípios de sanitização e higiene são violados. Se o alimento tem estado sujeito a condições que poderia permitir a entrada e/ou crescimento de agentes infecciosos ou toxigênicos, pode se tornar um veículo de transmissão de doenças (ICMSF,1984). O método de Contagem de microrganismo em placas é um método geral, que pode ser utilizados para contagem de grandes grupos microbianos, como aeróbios mesofilos, aeróbios psicotrópicos, termofilos, bolores e leveduras, variando – se o tipo de meio, a temperatura e o tempo de incubação (Hajdenwurcel, 1998; Silva et al.,1997). Assim, a pesquisa dos microrganismo indicadores é utilizada para avaliar qualidade microbiológica dos alimentos e apontar riscos de contaminações de origem fecal com provável presença de patógenos ou deterioração de alimentos, além de indicações relevantes sobre as condições higiênico-sanitária durante o processamento, a produção e o armazenamento (FRANCO & LANDGRAF, 1996). 2 OBJETIVO Determinar o número de microrganismos presentes na suspensão através dos métodos de contagem em placa. 3 MATERIAIS E MÉTODOS - Estufa bacteriológica regulada a 37ºC; - Placas de Petri estéreis; - Pipetas bacteriológicas; - Ágar padrão para contagem estéril; - Tubos contendo 9 mL de solução salina peptonada - Alça de Drigalski; Foi preparado medindo aproximadamente 10mL em 90mL de salina peptonada, após esse procedimento foi homogeneizada e diluída de 1/10. Após preparar as diluições necessárias, 1/100 e 1/1000, começou-se a parti da diluição de 1/10, da amostra preparada anteriormente e depois transferindo 1mL da diluição para os tubos com 9 mL de solução de salina. Distribui-se 100 microlitros de cada diluição no centro de placas de petri estéreis e depois foi-se distribuído a amostra de forma homogênea com a alça de Drigalski. Logo após, colocou-se na estufa a 37ºC por 48 horas. FIGURA 1: Diluição Seriada e Plaqueamento Diferencial Fonte: SCIELO - Disponível em: http://www.scielo.br/scielo.php?pid=S0101-20612006000100031&script=sci_arttext 4 RESULTADO E DISCUSSÃO Não foi possível retornar ao laboratório para visualizar as placas para análise do crescimento microbiano e fazer a contagem. Em teoria, serão considerados significativas as contagens das diluições que apresentam entre 30 a 300 UFC/grama formadoras de colônia. As leituras abaixo de 30 colônias na menor diluição 1/10, expressar como 10UFC/grama e leituras de acima de 300 colônias na maior diluição expressar como maior que 300 x 10 3 UFC/grama. Leituras entre 30 e 300 colônias, expressar o resultado multiplicando- se o valor encontrado, pelo fator de diluição correspondente. Ex: 250 unidades formadoras de colônias na diluição de 1:1000 Contagem padrão em placa: 2,5 x10 4 UFC/g 5 CONCLUSÃO Conclui-se que a contagem detecta em um alimento, o número de bactérias aeróbias ou facultativa e mesófilas presentes tanto sob a forma vegetativa quanto esporulada, a contagem padrão em placas tem sido usada como indicador de qualidade higiênica dos alimentos, fornecendo também ideia sobre seu tempo útil de conservação. 6 REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICAS FRANCO B.D.G.M. & LANDGRAF, M. Microrganismos patogênicos de importância nos alimentos. In FRANCO, B.D.G.M & LANDGRAF M. (Eds). Microbiologia dos alimentos. São Paulo: Atheneu, 1996, p.33-38. HAJDENWURCEL, J.R. Atlas de microbiologia de Alimentos. São Paulo: Fonte comunicação e Editora, 1998 66p. INTERNACIONAL COMNISSION ON MICROBIOLOGICAL SPECIFICATIONS FOR FOODS. Micro-organismos de los alimentos: técnicas de analises microbiológico. Zaragoza: Acribia,1984. 431p. KOMIYAMA, Claudia Marie et al. Características qualitativas de produtos elaborados com carne de frango pálida e normal. Ciência e Tecnologia de Alimentos, v. 29, p. 38-45, 2009. PELCZAR JR, MJ; CHAN, E.C.S.; KRIEG, N.R. Microbiologia: conceitos e aplicações 2.ed. São Paulo: McGraw-Hill, 1997. v.2. p.372-397: Microbiologia de Alimentos. SILVA N.; JUNQUEIRA, V.CA.; SILVEIRA, N.FA. Manual de métodos de análise microbiológico de alimentos. São Paulo: Varela, 1997.259p.