Meios de cultura e técnicas de semeadura

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Meios de cultura e técnicas de semeadura
· Os meios de cultivo consistem em material nutritivo, preparado em laboratório, que se destina ao cultivo artificial de microrganismos. Neles devem conter as substâncias exigidas pelas bactérias para o seu crescimento e multiplicação, como fontes de carbono (proteínas e açúcares), fontes de nitrogênio (peptonas) e fontes de energia. São também necessários alguns sais inorgânicos, vitaminas, minerais e outras substâncias que favorecem o crescimento. Além de nutrientes, é igualmente necessário que as condições de oxigênio (presença ou ausência), pH e pressão osmótica sejam adequadas ao cultivo do microrganismo. 
· Através do cultivo de microrganismo é possível aumentar sua quantidade em amostras com quantidade insuficiente, isola-los e quantifica-los, diferenciar grupos (patogênico, deteriorantes, etc.).
Tipos de meios de cultura
· Quanto ao seu estado físico os meios de cultura podem ser classificados em líquido, semissólido e sólido. No meio líquido, os nutrientes são dissolvidos em solução aquosa, o crescimento bacteriano muda seu aspecto e o meio sofre turvação. O meio semissólido possui na sua composição, além dos nutrientes, uma pequena porcentagem de ágar (0,5%) e, geralmente, são utilizados em tubos. Por fim, o meio sólido, além dos nutrientes, possui uma porcentagem maior de ágar (2%) e podem ser dispostos em tubos ou placas de Petri.
· Quanto a sua função, podem ser classificados como simples, complexos, seletivos e diferenciais. Os meios simples, possuem os componentes essenciais para o crescimento de microrganismos pouco exigentes. Os meios de cultura complexo, são aqueles que tem adicionados substâncias enriquecedoras como sangue, soro, ovo, extrato de leveduras, etc. Os meios seletivos favorecem o desenvolvimento dos determinados microrganismos em detrimento de outros, geralmente pela adição de substâncias inibidoras. Os meios diferenciais permitem o desenvolvimento de grupos de microrganismos com características relativamente definidas, o que permite diferenciar um grupo ou uma espécie de microrganismo.
· Quanto a sua forma de preparação, são classificados em meios prontos para uso, meios desidratados (precisam ser hidratados e homogeneizados) e meios formulados (preparados no laboratório com fórmulas comerciais).
Preparação dos meios de cultura
· Os insumos usados para preparo de meios de cultura devem ser apropriados, mantendo em local seco, arejado, livre de fontes de contaminação, ser datado o dia da sua produção, identificado, entre outros. O estoque de insumos também precisa ser controlado para eliminar riscos de contaminação.
· As etapas de preparação são: preparação e reidratação, dissolução e dispersão, verificação e ajuste do pH antes da esterilização, estocagem dos meios esterilizados até o momento do uso, esterilização/verificação após esterilização e, por fim, a distribuição. Se esse meio de cultura necessitar de suplementação, esta deve ser feita na etapa de verificação após esterilização.
· As condições de estocagem de meios de cultura variam de acordo o meio:
TÉCNICAS DE SEMEADURA
· A escolha da técnica para o cultivo de microrganismos em condições laboratoriais varia de acordo com o tipo de meio de cultura e a finalidade do cultivo, porém, algumas regras devem ser seguidas nas inoculações. 
1. A agulha e alça bacteriológica devem ser esterilizadas por flambagem antes e após qualquer cultivo. Deve-se tomar cuidado para esfriá-las antes da coleta. 
2. Os recipientes devem sempre ser abertos próximos à chama do bico de Bunsen.
3. Deve-se evitar ao máximo que as tampas dos tubos e placas fiquem abertos sob a bancada durante o cultivo.
Semeadura em superfície por esgotamento
Semeadura por espalhamento – Spread plate
Semeadura em profundidade – Pour plate
Técnica da inoculação em tubo de ensaio – Ágar inclinado
Técnica da inoculação em tubo com caldo – difusão
· A técnica de semeadura em meio líquido objetiva observar a respiração das bactérias.
· A técnica de semeadura em meio semissólido objetiva a motilidade das bactérias, e em meio semissólido com ágar inclinado objetiva obter uma concentração de massa bacteriana. 
· A técnica de semeadura em meio sólido (placa de Petri: técnica de esgotamento) objetiva obter culturas puras de amostras que contenham microbiota mista, sendo igualmente útil para o estudo da morfologia colonial. 
· A técnica de semeadura em meio sólido (placa de Petri: técnica de pour plate) objetiva obter colônias isoladas ou realizar contagem de colônias em placas. Nessa técnica, deve-se ter cautela para não adicionar o meio em temperatura elevadas sobre o inóculo, pois poderá matar os microrganismos.