POP CONTROLE DE QUALIDADE (1)

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UNIVERSIDADE METODISTA DE SÃO PAULO 
FACULDADE DE CIÊNCIAS MÉDICAS E DA SAÚDE 
CURSO DE FARMÁCIA 
 
 
 
 
 
AMANDA FIUZA 
JÉSSICA NASCIMENTO 
LUANA LINS 
TAYANE DE PAULA 
 
 
 
 
 
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO 
CONTROLE DE QUALIDADE 
ANÁLISES DO ACICLOVIR CREME 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
SÃO BERNARDO DO CAMPO 
2021 
 
 
 
1. Objetivo 
Padronizar as fases analíticas físico-químicas do medicamento aciclovir pomada. 
2. Responsabilidade 
O conhecimento deste POP é direcionado aos analistas físico-químicos, tornando-os 
responsáveis por proceder corretamente em análises físico-químicas padrão do aciclovir 
em sua apresentação farmacêutica pomada. 
3. Alcance 
Colaboradores de analises físico-químicas em todos os seus níveis. 
4. Procedimentos 
Semissólidos: Descrição, aspecto, característica organolépticos, peso médio. 
Descrição (Forma Farmacêutica) Creme 
Aspecto Homogêneo e isento de grumos 
Característica organoléptica Branco, odor característico e liso 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
PROCEDIMENTO OPERACIONAL PADRÃO - POP 
Código POP-CQ-001 
Edição Nº 01 
ANÁLISE FISICO-QUÍMICA DO ACICLOVIR CREME 
Data 14-05-2021 
Página Página 1 de 21 
Elaboração Revisão Aprovação 
 
Amanda F Batista 
 
Luana Lins 
Tayane de Paula 
 
Jessica Nascimento 
Data: 24 /05/ 2021 Data: 24 /05/ 2021 Data: 27 /05/ 2021 
 
 
I. IDENTIFICAÇÃO 
TESTE ESPECTROFOTOMETRIA NO ULTRAVIOLETA, VISÍVEL E 
INFRAVERMELHO (5.2.14) 
As técnicas espectrofotométricas são fundamentadas na absorção da energia 
eletromagnética por moléculas, o que depende tanto da concentração quanto de suas 
estruturas químicas. De acordo com o intervalo de frequência da energia eletromagnética 
aplicada, a espectrofotometria de absorção pode ser dividida em ultravioleta, visível e 
infravermelho, podendo ser utilizada como técnica de identificação e quantificação de 
substâncias. 
 
II. CARACTERÍSTICAS 
DETERMINAÇÃO DE PESO (5.1.1) 
O teste se aplica a formas farmacêuticas sólidas em dose unitária (comprimidos não 
revestidos, comprimidos revestidos, pastilhas, cápsulas duras e moles e supositórios), 
formas farmacêuticas sólidas acondicionadas em recipientes para dose unitária (pós 
estéreis, pós liofilizados, pós para injetáveis e pós para reconstituição de uso oral) e a 
formas farmacêuticas sólidas e semissólidas acondicionadas em recipientes para doses 
múltiplas (granulados, pós, géis, cremes, pomadas e pós para reconstituição). As pesagens 
devem ser feitas em balanças de sensibilidade adequada. 
 
 
 
 
 
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PROCEDIMENTO PARA PRODUTOS EM DOSE UNITÁRIA 
Para produtos em dose unitária, o teste possibilita verificar se as unidades de um mesmo 
lote apresentam uniformidade de peso. Para realizar o teste, é necessário determinar, 
previamente, o peso médio de unidades do lote. 
 
GRANULADOS, PÓS, GÉIS, CREMES E POMADAS 
Nota: para realizar o teste, é necessário conhecer a quantidade nominal do envase. 
Pesar, individualmente, 10 unidades. Remover o conteúdo e lavar os respectivos 
recipientes utilizando solvente adequado. Secar, esfriar à temperatura ambiente e pesar 
novamente. A diferença entre as duas pesagens representa o peso do conteúdo. 
Determinar o peso médio do conteúdo das 10 unidades. O peso médio dos conteúdos não 
é inferior ao peso declarado e o peso individual de nenhuma das unidades testadas é 
inferior à porcentagem indicada na Tabela 2, em relação ao peso declarado. 
Caso não seja cumprida essa exigência, determinar o peso individual do conteúdo de 20 
unidades adicionais. O peso médio do conteúdo das 30 unidades não é inferior ao peso 
declarado, e o peso individual de não mais que uma unidade em 30 é inferior à 
porcentagem indicada na Tabela 2, em relação ao peso declarado. 
 
 
III. ENSAIOS DE PUREZA 
CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (5.2.17.1) 
Consiste no sistema cromatográfico em que a separação dos componentes de uma mistura 
ocorre através da migração diferencial sobre uma fase estacionária composta por uma fina 
 
 
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camada de adsorvente aplicado sobre um suporte plano, o qual pode ser constituído de 
diversos materiais tais como vidro, alumínio ou poliéster. A fase móvel por sua vez é 
constituída por diversas misturas de solventes e permanece no interior de um recipiente 
ou cuba de material transparente e inerte, geralmente vidro, permanecendo vedada, onde 
se deposita a cromatoplaca em posição vertical sob uma atmosfera saturada da fase móvel. 
 
 
EQUIPAMENTOS E PROCEDIMENTOS: Os equipamentos utilizados para a 
cromatografia em camada delgada consistem em: placa, cuba ou câmara de eluição, fase 
estacionária, fase móvel, sistema revelador. As placas geralmente são de vidro, alumínio 
ou material plástico. Os tamanhos variam conforme a seguir: 20 cm x 20 cm; 10 cm x 20 
cm; 10 cm x 10 cm; 5 cm x 10 cm. 
 
Fases estacionárias (adsorventes) 
 
Sílica – É o adsorvente mais amplamente utilizado na CCD. É um adsorvente amorfo e 
poroso. É usado também na cromatografia em coluna; entretanto, a sílica utilizada em 
CCD é mais fina. A sílica é preparada por espontânea polimerização e desidratação do 
ácido silícico. As substâncias são adsorvidas pela sílica via ligação de hidrogênio e 
interação dipolo-dipolo. Uma sílica de condição satisfatória é aquela com 11 a 12% de 
água em peso. Um nível de 11 a 12% de umidade é alcançado quando a sílica está em 
equilíbrio com o ar, a uma umidade relativa de 50% e uma temperatura de 20 ºC. 
As sílicas comerciais possuem tamanhos de poros variáveis, entre 40 e 150 Ângstrons. 
Os tamanhos de partículas variam de 5 a 40 μm, com média de 10 a 15 μm, dependendo 
do fabricante. 
 
 
 
 
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Reduzindo-se o tamanho da partícula, aumenta-se a eficiência da sílica. Partículas de 
tamanho de 5 a 6 μm são utilizadas para preparar CCDAE (Cromatografia em camada 
delgada de alta eficiência). Os tamanhos de poros afetam a seletividade e, portanto, 
podem ser utilizados para as taxas de migração e resolução dos componentes das 
amostras. 
Os tamanhos de poros de sílica mais comuns comercialmente são 40, 60, 80 e 100 
Ângstrons, sendo a sílica 60 Ângstrons a mais versátil e amplamente utilizada. As sílicas 
são utilizadas para a separação de compostos lipofílicos, como aldeídos, cetonas, fenóis, 
ácidos graxos, aminoácidos, alcaloides, terpenoides e esteroides, usando-se o mecanismo 
de adsorção. 
Alumina – Depois da sílica, é o adsorvente mais utilizado. As propriedades físicas da 
alumina são similares às da sílica em termos de tamanho de partícula, diâmetro médio do 
poro e superfície. São disponíveis comercialmente alumina ácida (pH 4,0 - 4,5), neutra 
 
(7,0 - 8,0) e básica (9,0 - 10,0). Assim como a sílica, a alumina separa os componentes 
das amostras por polaridade, por meio de ligações de hidrogênio, interação ácido-base de 
Lewis ou interações dipolo-dipolo. A seletividade da alumina na CCD de adsorção é 
similar à sílica-gel,sendo a alumina um adsorvente melhor que a sílica para a separação 
de substâncias ácidas lipofílicas. A alumina de caráter ácido atrai fortemente substâncias 
básicas, enquanto a alumina de caráter básico atrai mais fortemente substâncias ácidas. A 
alumina retém substâncias aromáticas mais fortemente que a sílica-gel. Tem o 
inconveniente de promover a catálise de algumas reações de substâncias lábeis. É 
empregada na separação de vitaminas lipossolúveis, alcaloides, certos antibióticos e 
hidrocarbonetos policíclicos. 
 
 
 
 
 
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Paula 
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Data: 24 /05/ 2021 Data: 24 /05/ 2021 Data: 27 /05/ 2021 
 
 
 
Kieselguhr - É a Terra de Diatomácea termicamente tratada, de granulação de 5 a 40 μm. 
Seu principal constituinte é SiO2. Uma variedade de outros compostos inorgânicos 
também está presente. Os tamanhos dos poros são muito variáveis, suas características a 
tornam adequada para a separação de açúcares, aminoácidos e outras substâncias polares 
similares. 
Celulose - A celulose é um polissacarídeo altamente polimerizado por monômeros de 
glicose. A presença de grande número de grupos hidroxila livre permite ligações de 
hidrogênio com líquidos de baixa massa molecular como água e álcoois. A celulose é, 
portanto, adequada para a separação de substâncias hidrofílicas, tais como carboidratos e 
aminoácidos. 
Poliamida - Em contraste com a celulose, a poliamida é uma resina sintética. Dois tipos 
de poliamida são utilizados: poliamida 6 e poliamida 11. A poliamida 6 vem da 
aminopolicaprolactama, enquanto a poliamida 11 é preparada a partir do ácido 
poliaminoundecanóico. 
 
Poliamidas são utilizadas para a separação de compostos polares que são capazes de 
interagir com o grupo amida por ligações de hidrogênio devido à sua estrutura molecular. 
Dentre elas estão aminoácidos e derivados, benzodiazepínicos, ácidos carboxílicos, 
ciclodextrinas, ácidos graxos, flavonoides, conservantes e praguicidas. 
 
Silicato de magnésio - ideal para a separação de açúcares, antraquinonas, flavonas, 
glicosídeos, esteroides, lipídeos, resíduos de praguicidas, vitaminas, carbazóis, acetato de 
hidrocortisona. 
Reveladores e métodos de detecção 
 
 
 
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Após o desenvolvimento da cromatografia e a evaporação dos solventes, passa-se ao 
método de revelação das manchas. Este, por sua vez, pode ser físico ou químico. Como 
método físico, a luz ultravioleta (lâmpadas com emissão de radiação entre 254 e 366 nm) 
é comumente empregada no caso de substâncias que se tornam fluorescentes quando 
excitadas por luz UV ou visível. Os métodos químicos compreendem a utilização de 
reagentes cromógenos. Há uma ampla lista de reveladores apropriados para cada grupo 
de substâncias. 
 
Identificação 
A posição final de cada mancha é designada pelo Rf (fator de retenção). Após a revelação 
da cromatoplaca, mede-se a distância atingida por cada mancha a partir da origem. Essa 
distância é uma fração da distância total percorrida pelo solvente na fase estacionária. 
Rf = (distância atingida pela mancha a partir da origem) / (distância percorrida pelo 
solvente desde a origem) 
 
IV. TESTE DE SEGURANÇA BIOLÓGICA 
CONTAGEM DO NÚMERO TOTAL DE MICRO-ORGANISMOS 
MESOFÍLICOS (5.5.3.1.2) 
Com esse teste é possível determinar o número total de bactérias mesofílicas e fungos em 
produtos e matérias-primas não estéreis e é aplicado para determinar se o produto satisfaz 
às exigências microbiológicas farmacopeicas, conforme Tabela 1 - Limites microbianos 
para produtos não estéreis (5.5.3.1.5). Quando usado para esse propósito, deve-se seguir 
as indicações dadas, incluindo o número de amostras tomadas e interpretação dos 
resultados. O teste não é aplicado para produtos que contêm micro-organismos viáveis 
como ingrediente ativo. Esse teste consiste na contagem da população de micro- 
 
 
 
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organismos que apresentam crescimento visível, em até cinco dias, em Ágar caseína-soja 
a (32,5 ± 2,5) ºC e em até sete dias, em Ágar Sabouraud-dextrose a (22,5 ± 2,5) ºC. 
Métodos microbiológicos alternativos, inclusive os automatizados, podem ser utilizados 
desde que sua equivalência com o método farmacopeico tenha sido devidamente validada. 
PREPARAÇÃO DAS AMOSTRAS 
Produtos hidrossolúveis: transferir 10 g ou 10 mL da mistura de amostra para 90 mL de 
Solução tampão cloreto de sódio-peptona pH 7,0, Solução tampão fosfato pH 7,2, Caldo 
caseína-soja ou outro diluente adequado. Se necessário, ajustar o pH para 6,0 a 8,0 com 
solução HCl 0,1 M ou NaOH 0,1 M. Preparar diluições decimais sucessivas com o mesmo 
diluente. 
Produtos de natureza não lipídica insolúveis em água: preparar uma suspensão de 10 g 
ou 10 mL da mistura de amostra em Solução tampão cloreto de sódio-peptona pH 7,0, 
Caldo caseína-soja ou outro diluente adequado. Em geral, a proporção de diluente e 
amostra é de 10:1, mas as características do produto podem exigir que seja alterada essa 
relação. Pode ser adicionado agente tensoativo como polissorbato 80, na concentração de 
1 g/L, para facilitar a dispersão. Se necessário, ajustar o pH para 6,0 a 8,0. Preparar 
diluições decimais sucessivas com o mesmo diluente. 
 
 
Produtos de natureza lipídica: 
 Método de filtração em membrana: solubilizar 1 g ou 1 mL da mistura de amostra em 
100 mL de miristato de isopropila esterilizado por filtração em membrana (e seu extrato 
aquoso deve apresentar pH não inferior a 6,5) e aquecido a 40 °C a 45 °C. Pode ser 
utilizado polissorbato 80 estéril ou outro agente tensoativo não inibitório. 
 
 
 
 
 
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Método de contagem em placa: transferir 10 g ou 10 mL da mistura de amostra para frasco 
contendo, no máximo, 5 g de polissorbato 20 ou 80 estéril ou outro agente tensoativo não 
inibitório. Aquecer, se necessário, a uma temperatura entre 40 °C e 45 °C. 
Homogeneizar cuidadosamente mantendo a temperatura de 40 °C a 45 °C. Adicionar diluente 
adequado dentre os apresentados em Condições gerais (5.5.3.1.1) – Soluções e meios de cultura, 
previamente aquecido, na quantidade necessária para obter uma diluição a 1:10 do produto inicial. 
Homogeneizar, cuidadosamente, mantendo a temperatura máxima de 40 °C a 45 °C durante o 
tempo necessário para a formação de uma emulsão; em qualquer caso, no máximo, 30 minutos. 
Se necessário, ajustar o pH entre 6,5 e 7,5. Preparar diluições decimais sucessivas com o mesmo 
diluente acrescido de polissorbato 20 ou 80. 
 
Cremes e pomadas insolúveis em miristato de isopropila 
Transferir 10 g da mistura de amostra para obter uma diluição a 1:10 em Caldo caseína-soja 
contendo 0,1 de tetradecilsulfato de sódio, aquecido de 40 °C a 45 °C. Homogeneizar até mistura 
homogênea. 
 Homogeneizar, cuidadosamente, mantendo sempre a temperaturadurante o tempo mínimo 
necessário para a formação de uma emulsão; em qualquer caso, no máximo, 30 minutos. Se 
necessário, ajustar o pH para 6,5 a 7,5. Preparar diluições decimais sucessivas com o mesmo 
diluente acrescido de 0,1% de tetradecilsulfato de sódio. 
 
Correlatos: 
Algodão e gaze: transferir três porções de 3,3 g das partes mais internas das amostras para Solução 
tampão cloreto de sódio-peptona pH 7,0 contendo agente inativante apropriado. Preparar 
diluições decimais sucessivas com o mesmo diluente. 
 
 
 
 
 
 
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Outros correlatos: transferir 10 unidades cuja forma e dimensão permita sua fragmentação ou 
imersão total em, no máximo, 1000 mL de Solução tampão cloreto de sódio-peptona pH 7,0 ou 
outro diluente adequado. Deixar em contato entre 10 e 30 minutos. Preparar diluições decimais 
sucessivas com o mesmo diluente. Para aqueles que não podem ser fragmentados ou imersos, 
introduzir assepticamente no recipiente 100 mL de Solução tampão cloreto de sódio-peptona pH 
7,0. Homogeneizar. Utilizar método de filtração em membrana de 0,45 μm. 
O método para preparação depende das características físicas do produto a ser testado. Se nenhum 
dos procedimentos descritos se demonstrar satisfatório, desenvolver um procedimento adequado. 
Alguns produtos podem requerer um aquecimento maior na preparação da amostra, mas esta não 
deve ultrapassar 48 °C 
 
ANÁLISE DO PRODUTO 
 Quantidade de amostra 
Salvo indicação em contrário, utilizar mistura de amostras contendo 10 g ou 10 mL do 
produto a examinar. Utilizar 10 unidades para aerossol – forma líquida ou sólida e para 
dispositivos transdérmicos. 
A quantidade a ser testada poderá ser reduzida no caso de substâncias ativas que são 
formuladas nas seguintes condições: a quantidade por dose unitária (exemplo: 
comprimido, cápsula) é menor ou igual a 1 mg. Nesse caso, a quantidade de amostra a ser 
testada não deve ser menor que a quantidade presente em 10 doses unitárias. 
Para produtos em que o tamanho do lote é extremamente pequeno (isso é, menor que 1000 
mL ou 1000 g), a quantidade a ser testada deve ser 1,0% do lote ou menor quando 
 
 
 
 
 
 
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Data: 24 /05/ 2021 Data: 24 /05/ 2021 Data: 27/05/ 2021 
 
 
justificado ou autorizado. Para produtos onde o número total de unidades no lote é menor 
que 200, usar duas unidades ou uma unidade se o lote for menor ou igual a 100 unidades. 
Na amostragem de produtos em processamento, coletar três amostras do início, quatro do 
meio e três do fim do processo. Executar o teste na mistura dessas amostras. 
 
PROCEDIMENTOS 
A determinação pode ser efetuada pelo método de Filtração em membrana, Contagem em 
placa ou Método dos Tubos Múltiplos (NMP). Esse último é reservado para as 
determinações bacterianas que não possam ser realizadas por um dos outros métodos e 
quando se espera que o produto apresente baixa densidade bacteriana. 
A escolha do método é determinada por fatores tais como a natureza do produto e o 
número esperado de micro-organismos, sendo que o método escolhido deve ser 
devidamente validado. 
FILTRAÇÃO EM MEMBRANA 
 Utilizar equipamento de filtração que possibilite a transferência da membrana para os 
meios de cultura. As membranas de nitrato de celulose, por exemplo, podem ser utilizadas 
para soluções aquosas, oleosas ou fracamente alcoólicas e as membranas de acetato de 
celulose para soluções fortemente alcoólicas. Preparar a amostra usando método mais 
adequado previamente determinado. 
Transferir 10 mL, ou a quantidade de diluição que represente 1 g ou 1 mL da amostra a 
ser testada, para duas membranas e filtrar imediatamente. Se necessário, diluir a amostra 
de forma a obter contagem de colônias entre 10 e 100 UFC. Lavar as membranas pelo 
menos três vezes com aproximadamente 100 mL do fluido de lavagem adequado. 
Transferir uma das membranas para a superfície de uma placa contendo Ágar caseína-
soja, incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante três a cinco dias, para determinação do número de 
micro-organismos aeróbicos totais. 
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Transferir a outra membrana para a superfície de uma placa contendo Ágar Sabouraud-dextrose 
e incubar a (22,5 ± 2,5) °C durante cinco a sete dias, para a determinação de bolores e leveduras. 
Calcular o número de UFC por grama ou mililitro do produto. 
 Quando analisar dispositivos transdérmicos e produtos médicos, filtrar, separadamente, 10% do 
volume da preparação, conforme procedimento de adequação do produto, e proceder à lavagem 
e incubação conforme descrito anteriormente. 
CONTAGEM EM PLACA 
 Método de profundidade - Adicionar 1 mL da amostra preparada como descrito em Preparação 
das amostras, em placa de Petri e verter, separadamente, de 15 mL a 20 mL de Ágar caseína-soja 
e Ágar Sabouraud-dextrose mantidos de 45 °C a 50 °C. Utilizar duas placas para cada meio e 
diluição. Incubar as placas contendo Ágar caseína-soja a (32,5 ± 2,5) °C durante três a cinco dias 
e as placas contendo Ágar Sabouraud dextrose a (22,5 ± 2,5) °C durante cinco a sete dias para 
determinação do número de micro-organismos aeróbicos totais e bolores e leveduras, 
respectivamente. Somente as placas que apresentarem número de colônias inferior a 250 
(bactérias) e 50 (bolores e leveduras) por placa deverão ser consideradas para o registro dos 
resultados. Utilizar a média aritmética das placas de cada meio e calcular o número de UFC por 
grama ou mL do produto. 
Método de superfície - Adicionar em placas de Petri, separadamente, de 15 mL a 20 mL de Ágar 
caseína-soja e Ágar Sabouraud-dextrose e deixar solidificar. Secar as placas. Adicionar à 
superfície de cada meio de cultura, 0,1 mL da amostra preparada como descrito em Preparação 
das amostras. Incubar as placas contendo Ágar caseína-soja a (32,5 ± 2,5) °C durante três a cinco 
dias e as placas contendo Ágar Sabouraud-dextrose a (22,5 ± 2,5) °C durante cinco a sete dias 
para determinação do número de micro-organismos aeróbicos totais e bolores e leveduras, 
respectivamente. Utilizar a média aritmética das placas de cada meio e calcular o número de UFC 
por grama ou mL do produto. 
Exemplo de cálculo: 
 
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Caso o número de colônias nas placas de todas as diluições seja menor que 20, registrar a 
contagem correspondente à de menor diluição e expressar como UFC/g ou mL. Se as placas de 
todas as diluições não apresentarem colônias, registrar a contagem como sendo menor que uma 
vez a menor diluição correspondente. Por exemplo, se nenhum crescimento for detectado na 
diluição 1:100, expressar a contagem como menor que 100 UFC/g ou mL. 
NÚMERO MAIS PROVÁVEL 
Preparar a amostra conforme procedimentos de adequação do produto. Preparar diluições 1:10; 
1:100; 1:1000. Transferir1 mL de cada uma das diluições, para três tubos, contendo, cada um, 9 
mL de Caldo caseína-soja. Incubar todos os tubos a (32,5 ± 2,5) °C durante três a cinco dias. 
Anotar o número de tubos positivos e o número de tubos negativos. Se a natureza da amostra 
tornar a leitura difícil, como, por exemplo, uma suspensão, efetuar subcultura para o mesmo caldo 
ou para Ágar caseína-soja por dois dias na mesma temperatura. Determinar o número mais 
provável de micro-organismos viáveis por grama ou mililitro do produto, de acordo com as 
informações descritas na Tabela 1. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
Elaboração Revisão Aprovação 
 
Amanda F Batista 
 
Luana Lins 
Tayane de Paula 
 
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PESQUISA DE MICRO-ORGANISMOS PATOGÊNICOS (5.5.3.1.3) 
 Esse método possibilita verificar a presença ou a ausência de micro-organismos específicos em 
meios seletivos. Os procedimentos experimentais devem incluir etapas de pré-enriquecimento 
para garantir a recuperação dos micro-organismos, se presentes no produto. O resultado deve 
satisfazer às exigências microbiológicas farmacopeicas, conforme Tabela 1 - Limites microbianos 
para produtos não estéreis (5.5.3.1.5). 
Métodos microbiológicos alternativos, inclusive os automatizados, podem ser utilizados desde 
que sua equivalência ao método farmacopeico tenha sido devidamente validada. 
PROCEDIMENTO 
Bactérias gram-negativas bile tolerantes 
Preparo da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de no mínimo 1 g 
ou 1 mL do produto a ser testado, conforme descrito em Contagem do número total de 
microorganismos mesofílicos (5.5.3.1.2), usando Caldo caseína-soja (Diluição A) como diluente. 
Homogeneizar e incubar a (22,5 ± 2,5) °C por duas horas e não mais que cinco horas (tempo 
necessário para reativar a bactéria, mas não o suficiente para estimular a multiplicação do 
microorganismo). 
Teste de ausência: homogeneizar a Diluição A e transferir volume correspondente a 1 g ou 1 mL 
do produto para o Caldo de enriquecimento para enterobactérias Mossel (Aeromonas e 
Pseudomonas também podem crescer neste meio, bem como outros tipos de bactérias). Incubar a 
(32,5 ± 2,5) °C por 24 a 48 horas. Preparar subcultura em placas contendo Ágar violeta vermelho 
neutro glicose. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. O produto cumpre o teste se não 
houver crescimento de colônias. 
Teste quantitativo (seleção e subcultura): diluir quantidade apropriada da Diluição A para o Caldo 
de enriquecimento para enterobactérias Mossel, de modo a obter diluições contendo 0,1; 0,01 e 
0,001 g (ou 0,1; 0,01 e 0,001 mL) do produto a ser testado. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 24 
a 48 horas. Para cada tubo positivo, realizar subculturas em Ágar violeta vermelho neutro glicose. 
Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. 
Interpretação: o crescimento de colônias bem desenvolvidas de bactérias Gram-negativas, 
geralmente vermelhas ou avermelhadas, indica contaminação (resultado positivo). Anotar os 
resultados positivos e negativos. Determinar o número mais provável de bactérias por grama ou 
mililitro do produto segundo Tabela 1. 
 
 
 
 
 
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Escherichia coli 
Preparo da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de, no 
mínimo, 1 g do produto a ser examinado conforme descrito em Contagem do número total 
de micro-organismos mesofílicos (5.5.3.1.2). 
Utilizar 10 mL da diluição para 90 mL de caldo de enriquecimento (Caldo caseína-soja) 
ou quantidade correspondente a 1 g ou 1 mL. Homogeneizar e incubar (32,5 ± 2,5) °C 
durante 18 a 24 horas. 
Seleção e subcultura: homogeneizar e transferir 1 mL da amostra enriquecida para 100 
mL de Caldo MacConkey. Incubar a (43 ± 1) °C durante 24 a 48 horas. Realizar 
subcultura em placa de Ágar MacConkey e incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 72 
horas. 
 
 
 
 
 
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Interpretação: o crescimento de colônias vermelhas, geralmente não mucosas, com 
micromorfologia característica de bacilo Gram-negativo, indica presença provável de E. 
coli que deve ser confirmada por testes de identificação microbiana. O produto cumpre o 
teste se não for observado crescimento de tais colônias ou se as provas microbianas forem 
negativas. 
Salmonella 
 
Preparação da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de, no 
mínimo, 10 g ou 10 mL do produto a ser examinado, conforme descrito em Contagem do 
número total de micro-organismos mesofílicos (5.5.3.1.2). Homogeneizar e incubar (32,5 
± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. 
Seleção e subcultura: homogeneizar e transferir 0,1 mL do conteúdo para 10 mL de Caldo 
enriquecimento Salmonella Rappaport Vassiliadis. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 
a 24 horas. Realizar subcultura em placa contendo Ágar xilose lisina desoxicolato e 
incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 48 horas. 
Interpretação: o crescimento de colônias bem desenvolvidas, vermelhas com ou sem 
centro negro indica presença provável de Salmonella que deve ser confirmada por testes 
de identificação microbiana. O produto cumpre o teste se não for observado crescimento 
de tais colônias ou se as provas microbianas forem negativas. 
 
 
 
 
 
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Pseudomonas aeruginosa 
 
Preparação da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de, no 
mínimo, 1 g do produto a ser examinado, conforme descrito em Contagem do número 
total de microorganismos mesofílicos (5.5.3.1.2). Utilizar 10 mL da diluição para 90 mL 
de Caldo de caseína-soja ou quantidade correspondente a 1 g ou 1 mL. Homogeneizar e 
incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. 
Quando testar o dispositivo transdérmico, filtrar 50 mL de Caldo caseína-soja por 
membrana estéril e transferir a membrana para 100 mL de Caldo caseína-soja. Incubar a 
(32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. 
 
Seleção e subcultura: homogeneizar e transferir uma alça para placa contendo Ágar 
cetrimida. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 72 horas. O crescimento de colônias 
indica presença provável de Pseudomonas aeruginosa que deve ser confirmada por testes 
de identificação microbiana. O produto cumpre o teste se não for observado crescimento 
de tais colônias ou se as provas de identificação forem negativas. 
 
Staphylococcus aureus 
Preparação da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de, no 
mínimo, 1 g do produto a ser examinado conforme descrito em Contagem do número total 
de microorganismos mesofílicos (5.5.3.1.2). Utilizar 10 mL da diluição para 90 mL de 
caldo de enriquecimento (Caldo caseína-soja) ou quantidade correspondente a 1 g ou 1 
mL. Homogeneizar e incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24horas. 
 
 
 
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Quando testar o dispositivo transdérmico, filtrar 50 mL de caldo de enriquecimento por 
membrana estéril e transferir a membrana para 100 mL de Caldo caseína-soja. Incubar a 
(32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 24 horas. 
Seleção e subcultura: homogeneizar e transferir uma alça para placa contendo Ágar sal 
manitol. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 18 a 72 horas. 
Interpretação: o crescimento de colônias amarelas ou brancas rodeada por uma zona 
amarela indica presença provável de S. aureus que deve ser confirmada por testes de 
identificação microbiana. 
O produto cumpre o teste se não for observado crescimento de tais colônias ou se as 
provas de identificação foram negativas. 
 
Clostridium 
Preparação da amostra e pré-incubação: preparar a amostra conforme descrito em 
Contagem do número total de micro-organismos mesofílicos (5.5.3.1.2). Utilizar duas 
frações iguais correspondentes a, no mínimo, 1 g ou mL do produto a ser examinado. 
Aquecer uma das porções a 80 °C durante 10 minutos e esfriar imediatamente. Inocular 
10 mL de cada fração homogeneizada em dois frascos contendo 100 mL de meio Meio 
reforçado para Clostridium. Incubar em anaerobiose a (32,5 ± 2,5) °C durante 48 horas. 
Seleção e subcultura: transferir uma alça de cada frasco para placa contendo Ágar 
Columbia. Incubar em anaerobiose a (32,5 ± 2,5) °C durante 48 horas. 
 
 
 
 
 
 
 
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Interpretação: o crescimento de colônias catalase negativas, com micro morfologia de 
bacilo Grampositivo (com ou sem endósporos) indica presença provável de Clostridium. 
O produto cumpre o teste se não for observado crescimento de micro-organismo 
anaeróbio ou se o teste de catalase for negativo. 
Candida albicans 
Preparação da amostra e pré-incubação: preparar a amostra usando a diluição 1:10 de, no 
mínimo, 1 g ou mL do produto a ser examinado conforme descrito em Contagem do 
número total de microorganismos mesofílicos (5.5.3.1.2). Utilizar 10 mL da diluição para 
90 mL de Caldo Sabourauddextrose. Incubar 
a (32,5 ± 2,5) °C durante três a cinco dias. 
Seleção e subcultura: transferir uma alça para placa contendo Ágar Sabouraud-dextrose 
ou Ágar seletivo para Candida segundo Nickerson. Incubar a (32,5 ± 2,5) °C durante 24 
a 48 horas. 
 
Interpretação: o crescimento de colônias brancas em Ágar Sabouraud-dextrose ou 
colônias marrons/pretas em Ágar seletivo para Candida segundo Nickerson indica 
presença provável de C. albicans que deve ser confirmada por testes de identificação 
microbiana. O produto cumpre o teste se não for observado o crescimento das colônias. 
 
DOSEAMENTO 
Transferir quantidade de amostra equivalente a 7,5 mg de aciclovir para funil de 
separação com auxílio de 50 mL de ácido sulfúrico 0,5 M e agitar. Adicionar 50 mL de 
acetato de etila, agitar, esperar a separação das fases e coletar a fase aquosa inferior. 
 
 
 
 
 
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Lavar a fase orgânica com 20 mL de ácido sulfúrico 0,5 M, coletar a fase aquosa e juntar 
ao homogeneizar e filtrar, descartando os primeiros mililitros do filtrado. Transferir 10 
mL do filtrado para balão volumétrico de 50 mL e completar o volume com água. Preparar 
solução de aciclovir SQR na mesma concentração, utilizando o mesmo solvente. Medir 
as absorvâncias das soluções resultantes em 255 nm (5.2.14), utilizando ácido sulfúrico 
0,1 M para ajuste do zero. Calcular a quantidade de C8H11N5O3 no creme, a partir das 
leituras obtidas. 
 
TESTE ESPECTROFOTOMETRIA NO ULTRAVIOLETA, VISÍVEL E 
INFRAVERMELHO (5.2.14) 
As técnicas espectrofotométricas são fundamentadas na absorção da energia 
eletromagnética por moléculas, o que depende tanto da concentração quanto de suas 
estruturas químicas. De acordo com o intervalo de frequência da energia eletromagnética 
aplicada, a espectrofotometria de absorção pode ser dividida em ultravioleta, visível e 
infravermelho, podendo ser utilizada como técnica de identificação e quantificação de 
substâncias. 
 
 
EMBALAGEM E ARMAZENAMENTO 
 
Em recipientes bem fechados, em local seco e temperatura entre 15 ºC e 25 ºC. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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Data: 24 /05/ 2021 Data: 24 /05/ 2021 Data: 27/05/ 2021 
 
 
 
 
REFERÊNCIA 
 
AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA (ANVISA) Farmacopéia Brasileira 6ª 
edição. Brasilia. ANVISA, 2019ª. Disponível em < http://portal.anvisa.gov.br> Acesso em 14 
de março de 2021 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
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