Cromatografia - Parte I

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Métodos de análises 
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Cromatografia
Definição – é um método fisico-químico de separação dos componentes de uma mistura, realizada através da distribuição destes componentes entre duas fases (estacionária e móvel)
Fase estacionária – pode ser um sólido ou um líquido
Fase móvel – pode ser gasosa, líquida ou um fluido supercrítico (a fase móvel é vapor pressurizado).
Método de eluição – uma fase móvel pura que arrasta a amostra ao longo da coluna.
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Cromatografia
A separação depende da interação dos componentes da mistura com a fase móvel e com a fase estacionária. 
A interação dos componentes da mistura com estas duas fases é influenciada por diferentes forças intermoleculares, incluindo iônica, dipolar, apolar, e específicos efeitos de afinidade e solubilidade.
A identificação se dá mediante a comparação da interação de padrões com as fases estacionárias.
A quantificação é feita também pela comparação com padrões de concentrações conhecidas, através de curvas analíticas.
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Cromatografia
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 Cromatografia 
 Histórico
Mikhail Semenovich Tswett inventou a primeira técnica cromatografica em 1906 → separação dos componentes de extratos de folhas e gema de ovo, onde usou colunas de vidro recheadas com vários sólidos, finamente divididos, e arrastou os componentes com éter de petróleo.
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Cromatografia 
A origem destas palavras grega
chrom = cor e graphe = escrever.
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Cromatografia
Classificação 
De acordo com a forma física do sistema de cromatografia
Coluna
Colunas preparativas (d.i. 6-50 mm)
Analíticas (d.i. 2-6 mm)
Com microdiâmetro (d.i. < 2 mm)
Planar
 
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Cromatografia
Classificação 
De acordo com a fase móvel
Cromatografia gasosa
Cromatografia líquida
Cromatografia supercrítica (a fase móvel é vapor pressurizado).
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Classificação da cromatografia pelas formas físicas
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Cromatografia
Classificação 
De acordo com a Fase Estacionária
Líquida
Sólida
Quimicamente Ligadas
 De acordo com o modo de separação
Por Adsorção
Por Partição (ou absorção)
Por Troca Iônica
Por Bioafinidade
Por exclusão
ou
Partição
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Cromatografia
Adsorção
- Fase Móvel Líq. ou Gás
Fase Estacionária Sólida
 (sílica ou alumina)
Processos de 
Adsorção/Dessorção (o soluto volta a fase móvel)
Ligações de hidrogênio; 
Forças de Van der Waals
Ex: CCD, CGS, CLS, CSS.
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Cromatografia 
Partição ou absorção
O processo é intrafacial; ocorrendo por absorção ou partição, que se baseia nas diferentes solubilidades dos componentes das amostra na fase estacionária. 
A volta dos componentes à fase móvel depende de sua volatilidade (f.m. gasosa) ou de sua solubilidade (f.m. líquida).
Ex: CCD, CGS, CLS, CSS.
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Cromatografia 
Troca iônica
A fase estacionária é constituída de uma matriz onde são adicionados grupos funcionais ionizáveis. Assim os trocadores aniônicos que tem sítios ativos carregados +++, retêm aniôns (--), e os trocadores catiônicos, que tem sítios carregados negativamente, retêm cátions (+)
A fase móvel é geralmente, uma solução iônica com propriedades tamponantes,
 escolhidas de forma a ser compatível com o tipo de trocador usado.
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Cromatografia 
Exclusão
Processo puramente mecânico
As moléculas com tamanho efetivo intermediário migram com velocidades 
variáveis entre estes dois extremos, sendo que possuem penetração seletiva nos
poros, entrando em alguns, mas não em todos, e saindo da coluna em ordem 
relacionada com seu tamanho.
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Cromatografia 
Bioafinidade
Baseia-se principalmente, nas propriedades
biológicas ou funcionais das espécies que
interagem: a substancia a ser separada e a
fase estacionária.
Ou seja, é o isolamento seletivo de macro
moléculas biológicas, através da utilização
das propriedades dessas substâncias de
unirem-se reversivelmente a ligantes especí-
ficos.
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Cromatografia planar
A cromatografia em papel (CP) é uma técnica de partição líquido–líquido. Baseia-se na diferença de solubilidade das substâncias em questão entre duas fases imiscíveis, sendo geralmente a água um dos líquidos. Este método é muito útil para a separação de compostos polares, sendo largamente usado em bioquímica.
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Cromatografia planar
A cromatografia em camada delgada (CCD) é uma técnica de adsorção líquido–sólido. 
A separação dos componentes da mistura ocorre em função da migração diferencial sobre uma camada delgada de adsorvente, fixo numa superfície plana, por meio de uma fase móvel (líquido ou misturas de líquidos).
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Cromatografia planar
O parâmetro mais importante a ser considerado em CCD É A razão entre a distânci a pe r c o r r i d a p e l a substância e a distância percorrida pela fase móvel
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Cromatografia planar