RELATÓRIO 01 MICOLOGIA MICROCULTIVO DE FUNGOS ANEMÓFILOS

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CENTRO UNIVERSITÁRIO CATÓLICA DE SANTA CATARINA 
CURSO DE BIOMEDICINA 
MICOLOGIA 
ANGELA MARIA BRANGER 
ARIANE BUENO 
JULIANA FRANCINE LOURENZETTI 
NATHALIA VIANA 
VICTOR THIAGO DE SOUSA 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA: MICROCULTIVO DE FUNGOS 
ANEMÓFILOS 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
JOINVILLE, 2019 
 
 
 
 
SUMÁRIO 
1. INTRODUÇÃO 3 
2. OBJETIVO GERAL 5 
3. MATERIAIS E MÉTODOS 6 
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 8 
5. CONCLUSÕES 14 
REFERÊNCIAS 15 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
1. INTRODUÇÃO 
Os fungos que possuem dispersão aérea são denominados anemófilos, 
principais contaminantes do ar. Tais microrganismos colonizam diversos 
ambientes e pertencem a várias espécies conhecidos como patogênicas 
oportunistas, pois, geralmente são inofensivos em seu habitat natural, mas 
podem tornar-se patogênicos em um hospedeiro debilitado ou em condições de 
alta exposição aos propágulos dos fungos (BLACK, 2002; MELO et al. 2004; 
TORTORA et al. 2005). 
Os esporos, elementos fúngicos mais abundantes no ar atmosférico, são 
aeroalérgenos e, quando inalados, podem desencadear manifestações 
respiratórias (ARAÚJO et al. 1999; BELMIRO, 2012). Na microbiota fúngica 
anemófila tem predominado alguns gêneros considerados como os principais 
responsáveis por sintomatologias respiratórias, tais como ​Penicillium​, 
Aspergillus, ​Cladosporium​, ​Mucor​, ​Rhizopus e ​Alternaria (BERNARDI, 
NASCIMENTO 2005; SOUZA et al. 2008; SOUZA et al. 2010, PEREIRA et al. 
2013). 
A ocorrência de fungos anemófilos pode variar em cada cidade ou 
região, pois é facilmente influenciada por mudanças de temperatura, umidade 
relativa do ar, precipitação pluviométrica, nebulosidade, irradiação solar, 
direção e velocidade do vento, pressão barométrica e estações climáticas 
(MEZZARI, 2002; MENEZES et al. 2006; SOUZA et al. 2013). 
Uma das técnicas para a identificação de fungos filamentosos é o 
microcultivo, que permite uma boa análise microscópica, onde é possível 
observar a disposição original de suas estruturas. Este método também permite 
uma boa visualização de esporos assexuados. A identificação desses fungos 
pode ser realizada através de técnicas moleculares, que apresenta uma 
sensibilidade maior, porém, este método possui custos elevados (​IOGI A. A., 
2016). 
Visto a diversidade fúngica, o conhecimento sobre a microbiota, espécie, 
estrutura e classificação, torna-se indispensável o aprimoramento da técnica de 
 
 
 
microcultivo, para a diferenciação das estruturas micromorfológicas dos fungos 
e dessa forma realizar a liberação do resultado com total confiabilidade. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
2. OBJETIVO GERAL 
Realizar o preparo de microcultivo para diferenciação de estruturas 
micromorfológicas dos fungos. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
3. MATERIAIS E MÉTODOS 
Para a realização do microcultivo em lâmina, colocou-se sobre a lâmina 
esterilizada contida na placa de petri, um cubo de ágar Sabouraud dextrose, 
com o auxílio de um bisturi. Semeou-se o fungo ​Aspergillus brasiliensis ​(Figura 
1), com o auxílio da alça de platina nos 4 lados do cubo de ágar e cobriu-se o 
material com uma lamínula esterilizada. Realizou-se o mesmo procedimento 
para ​Penicillium variabile​ (Figura 2) e​ Trichoderma sp. ​ (Figura 3). 
Adicionou-se 4 mL de água destilada no fundo das 3 placas para evitar a 
dessecação do meio de cultura durante o crescimento dos fungos. Tampou-se 
a placa e incubou-se a 25 °C por 7 a 10 dias, até que observou-se 
desenvolvimento de hifas com ou sem pigmentação. 
Figura 1: Repique do fungo ​Aspergillus brasiliensis​ em lâmina. 
 
Fonte: os autores. 
Figura 2: Repique do fungo ​Penicillium variabile​ em lâmina. 
 
Fonte: os autores 
 
 
 
Figura 3: Repique do fungo ​Trichoderma sp.​. 
 
 
Fonte: os autores. 
 
Após a incubação dos fungos por 7 dias, realizou-se a identificação dos 
mesmos pelas estruturas microscópicas, observando-se principalmente as 
hifas e os tipos de esporos assexuados que os fungos apresentaram para a 
identificação de cada um deles. 
Retirou-se a lamínula e o ágar com cuidado, deixando somente a lâmina 
com o crescimento dos fungos. Pingou-se uma gota de azul de metileno para 
uma melhor visualização das estruturas íntegras dos fungos, colocou-se uma 
lamínula esterilizada por cima e realizou-se a visualização na microscopia. Os 
resultados de cada um dos fungos estão descritos no item 4. 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO 
Após o tempo de incubação (7 dias à 37ºC), os fungos foram analisados 
na forma microscópica, onde observou-se a micromorfologia pelo microcultivo 
entre a lâmina e a lamínula coradas com azul de metileno. Verificou-se os 
seguintes resultados: 
Figura 01: Microscopia óptica do fungo ​Aspergillus brasiliensis. 
 
Fonte: os autores 
 
Na figura 1, pode-se observar a presença de hifas hialinas (B), septadas 
(B), dando origem aos conídios (A), que são as estruturas de reprodução 
assexuada do gênero ​Aspergillus​. 
 
Figura 02: Microscopia óptica do fungo ​Aspergillus brasiliensis​. Na figura é 
possível observar a presença de esporos assexuados já esporulados (conídios) 
(A) e a presença de hifas hialinas e septadas (B). 
 
 
 
 
Fonte: os autores. 
 
Os ascomicetos, grupo que engloba tanto leveduras quanto fungos 
filamentosos, como o caso do ​Aspergillus brasiliensis​, são conhecidos por seu 
papel na decomposição da matéria orgânica vegetal (AGUIAR, C. M; LUCENA, 
S. L., 2011) e se reproduzem de forma assexuada pela formação de conídios 
(A), como é possível visualizar na Figura 2. 
Além disso, os fungos do gênero ​Aspergillus por se reproduzirem de 
forma assexuada, tem como uma das principais características de 
contaminação no homem, a inalação por conídios de tamanho reduzidos, 
facilitando sua disseminação, podendo reproduzir-se à temperatura de 37ºC, 
sendo estes os principais fatores patogênicos destacados (OLIVEIRA, J. C, 
2014). 
Fungos filamentosos presentes no meio ambiente hospitalar, também 
podem causar infecção em pacientes suscetíveis. O gênero ​Aspergillus sp. (​A. 
terreus​, ​A. fumigatus​, ​A. flavus e ​A. niger​) é o mais citado na literatura como 
fungo oportunista, especialmente em pacientes transplantados de medula 
óssea e neutropênicos (ANVISA, 2004). 
 
Figura 3: Microscopia óptica do fungo ​Penicillium variabile​ em aumento de 40x. 
 
 
 
 
Fonte: OLIVEIRA, J.C. 
 
A figura 3 apresenta hifas septadas hialinas (B), conidióforo com 
vesícula (A), e conídios (C). O gênero ​Penicillium possui grande importância, 
sendo utilizado como organismo modelo em diversos estudos de pesquisa 
básica e pesquisa aplicada, como, por exemplo, o controlebiológico, secreção 
de metabólitos secundários, fonte de novos fármacos para a indústria 
farmacêutica e produção de enzimas hidrolíticas de interesse industrial como 
proteases, lipases, pectinases, celulases e amilase, por exemplo (PALLU, A. P. 
S, 2010). 
A penicilina (Figura 4) está classificada na categoria das β- lactâmicos, 
juntamente com as cefalosporinas, os monobactâmicos e as carbapenemas. 
Contém em comum um núcleo básico, o anel β- lactâmico sendo composto por 
três átomos de carbono e um átomo de nitrogênio (PELCZAR et. al., 1997). 
 
Figura 4: A estrutura principal da penicilina (ácido 6-aminopenicilânico) comum 
a todas as penicilinas. 
 
 
 
 
Fonte: (PELCZAR et. al,, 1997) 
 
A benzilpenicilina benzatina, ou penicilina G benzatina, é um antibiótico 
ß-lactâmico e, por isso, tem ação bactericida contra as bactérias gram 
positivas, algumas gram negativas, espiroquetas e ​Actinomyces​. Devido à sua 
baixa concentração na corrente sanguínea, o uso deve ser restrito a 
microrganismos muito sensíveis, e evitado no tratamento inicial de infecções 
agudas com bacteremia (MIRANDA, M. C. C., 2002). 
A benzilpenicilina benzatina administrada por via intramuscular forma um 
depósito nos tecidos musculares. A partir destes depósitos ela é lentamente 
absorvida e libera, por hidrólise, a benzilpenicilina. Esta liberação é lenta, pode 
durar de 12 horas a vários dias, e proporciona, no sangue, concentrações 
relativamente baixas mas persistentes (MARTINDALE, 1996). 
 
Figura 05: Microscopia óptica do fungo ​Trichoderma ​em aumento de 40x. 
Apresenta hifas septadas (A) e conídios (B) 
 
Fonte: os autores 
 
 
 
 
 
 
O fungo Trichoderma sp. apresenta a seguinte posição taxonômica: 
Reino fungi, da ordem Hypocreales, gênero Hypocrea, pertencente à 
subdivisão Deuteromiceto com sua forma teleomórfica desconhecida ou 
ausente. É amplamente distribuído, e é constituído por fungos saprofíticos com 
capacidade de parasitar outros fungos, inclusive fitopatógenos. O processo de 
parasitismo envolve a secreção de antibióticos e enzimas que hidrolisam a 
parede celular do hospedeiro (VISITAÇÃO V. L.; LIMA V. M. G., 2009). 
 
Figura 6 - Aspectos morfológicos do fungo Trichoderma. A - cabeça úmida de 
conidióforo; B - Hifa geradora de dois conidióforos; C - Conidióforo da célula 
conidiogênica; D2 conídio. 
 
 
Fonte: https://fitopatologia1.blogspot.com/2010/12/descricao-micologicaaspectos-gerais-e.html 
O fungo ​Trichoderma sp​. possui colônias de crescimento rápido. 
Conidiação espalhada, de coloração verde-amarelado a verde-escuro. 
Também observa-se na colônia reverso amarelo pálido ou maçante. Os 
conídios tamanho e forma são semelhantes aos de ​Penicillium sp​. e ​Aspergillus 
sp.​, mas ​Trichoderma forma grupos pegajosos de conídios com um pigmento 
distintivo 
verde em vez de cadeias. Típico aglomerados de esporos verdes são 
identificados como ​Trichoderma​ (PASETTO, 2010). 
 
 
 
Fungos do gênero ​Trichoderma ​são encontrados naturalmente em solos 
e se destacam pela alta versatilidade no seu ciclo de vida e interações com 
outros organismos, além de possuírem habilidades como a promoção do 
crescimento de plantas, decomposição da matéria orgânica e antagonismo 
eficiente contra fitopatógenos (PASETTO, 2010). 
Espécies de ​Trichoderma são facilmente isoladas do solo por vários 
métodos convencionais, principalmente devido ao seu rápido crescimento e 
abundante produção de conídios. Devido a formação de clamidósporos e 
colonização de substratos orgânicos, também são obtidos por técnicas de 
lavagem dos solos (PASETTO, 2010). 
Trichoderma sp​. é eficaz no controle de inúmeros fungos 
fitopatogênicos, principalmente aqueles com estruturas de resistência 
consideradas difíceis de serem atacadas por microorganismos, como esporos, 
escleródios, clamidósporos e microescleródios (Melo, 1996). 
A sobrevivência de ​Trichoderma ​em solo natural é influenciada por 
diversos fatores como a temperatura, umidade, aeração, pH e teor de matéria 
orgânica. Sua temperatura ótima de crescimento é de 25ºC, ainda que o 
escalão de crescimento esteja entre os 15º e os 35ºC, e, temperaturas para 
baixo ou para cima, a ​Trichoderma sp. caracteriza-se por adquirir formas de 
resistências (PASETTO, 2010). 
Seu pH adequado encontra-se entre 6 e 6,5, mas também sobrevive em 
escalões superiores, pois a maioria das espécies possui capacidade de 
acidificar o pH de seu meio mediante libertação de ácidos orgânicos. Outra 
vantagem do fungo ​Trichoderma sp​. é sua tolerância frente a pesticidas 
químicos, no entanto, seu crescimento é reduzido pelos metais pesados 
presentes nos pesticidas (PASETTO, 2010). 
 
 
 
 
 
 
 
 
4. CONCLUSÕES 
O preparo de microcultivo para diferenciação de estruturas morfológicas 
de fungos é essencial para verificação e diferenciação de espécies, pois esses 
microrganismo podem causar danos como deterioração de materiais, 
processos alérgicos, intoxicações e infecções. 
A caracterização dos fungos de ambientes internos de áreas críticas, 
como por exemplo, hospital e da microbiota fúngica das mãos dos profissionais 
de saúde é uma importante medida, visando reduzir morbidade e mortalidade 
de indivíduos. É um teste importante que deve ser realizado principalmente em 
salas de pacientes imunocomprometidos, onde os mesmos estão sujeitos a 
exposição de patógenos do meio ambiente. 
Com a diferenciação fúngica é possível orientar medidas cabíveis para o 
controle de patógenos, juntamente com a terapia mais adequada a ser 
instituída. É notável que diante das técnicas realizadas em aula, o teste de 
microcultivo é essencial para identificação do agente causador, fazendo com 
que o indivíduo hospedeiro receba medicação adequada e eficaz. 
 
 
 
 
 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
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