ROTEIRO DETERMINAÇÃO PROTEÍNA

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DETERMINAÇÃO DE NITROGÊNIO TOTAL 
 MÉTODO DE KJELDAHL (PROTEÍNAS) 
Material
 
1. Tubos de digestão Kjeldahl 
2. Conjunto de digestão 
3. Destilador de nitrogênio 
4. Erlenmeyer 
5. Balança analítica 
6. Bureta 
Reagentes
 
1. Ácido sulfúrico (H2SO4 96-98%) 
2. Hidróxido de sódio (NaOH 1:2) 
3. Solução de ácido bórico (H3BO3) a 2% (p/v) mais indicadores (vermelho de metila e 
verde de bromocresol a 0,1%) 
4. Ácido clorídrico 0,02N 
5. Catalisador : sulfato de potássio e sulfato cúprico (10:1) 
PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL
 
DIGESTÃO
 
1. Pesar 100 a 200 mg de amostra e colocar no tubo de digestão 
2. Adicionar 1 a 2 g de catalisador 
3. Adicionar 4 a 5 ml de H2SO4 
4. Aquecer o tubo elevando lentamente a temperatura até 400 C. 
5. Quando o conteúdo ficar verde claro, deixar mais 30 minutos aquecendo. 
6. Retirar o tubo do digestor e deixar esfriar 
7. Adicionar 5 a 10 ml de água destilada e colocar o tubo no destilador 
DESTILAÇÃO
 
 Passar um tubo com água destilada no destilador antes da análise (!) 
1. Ligar o aquecimento no nível 1. 
2. Colocar no reservatório 20 ml de NaOH (1:2) e adicionar lentamente a soda por 
gravimetria, abrindo a torneira. 
3. Liberar a soda até que a amostra no tubo de digestão fique marrom. 
4. Aumentar o aquecimento para o nível 2. 
5. Colocar 20 ml de solução de ácido bórico mais indicadores num erlenmeyer e 
colocar no destilador com a ponta do condensador imergindo na solução. 
6. Destilar o conteúdo no tubo até que aconteça a viragem da cor do ácido bórico 
para verde. 
7. Marcar 10 minutos depois da viragem. 
8. Fazer dois testes em branco (sem amostra) 
9. Titular a solução do erlenmeyer ( cor verde) com a solução de HCl 0,02 N até 
coloração rosa. 
Obs.: Observar o nível de água no reservatório atrás do destilador quando começar a 
ferver. Se o nível estiver baixo e a luz verde a direita do aparelho começar a piscar, 
esperar acabar a destilação, retirar a amostra, desligar o aquecimento e ligar o botão 
da direita até a água alcançar o nível suficiente. 
CÁLCULO
 
(Va – Vb) x N x 14 x 100 
%N = 
peso da amostra (mg) 
Va = volume de HCl gasto na titulação da amostra (ml) 
Vb = volume de HCl gasto na titulação do branco (ml) 
N = normalidade da solução de HCl 
14 = peso molecular do nitrogênio 
100 = porcentagem 
% proteína = % N x fator específico 
Fator específico para a maioria dos alimentos = 6,25 
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